（湖南省中医药研究院附属医院湖南长沙410000）
摘要：目的分析大肠腺瘤及其癌变微卫星不稳定性与细胞增殖。方法选取2015年1月-2016年12月我院收治的大肠腺瘤患者30例，大肠腺瘤癌变患者20例，采用MSI检测方法和免疫组化方法，对这30例肠腺瘤患者及20例大肠腺瘤癌变患者的微卫星不稳定性与细胞增殖进行检测分析。结果对大肠腺瘤患者30例，大肠腺瘤癌变患者20例，共50例患者进行检测后发现，其中共检测出MSI11例，MSI的发生率为22.00%，有3例发生微卫星位点，微卫星位点的发生率为6.00%，这三例发生微卫星位点的患者中有两例癌变，有1例腺瘤?级不典型增生。其中有13例都是2个或2个以上位点发生MSI，发生率为26.00%；大肠腺瘤及其癌变组织共检测出7例MSI，这7例MSI阳性大肠腺瘤患者的PCNALI指数均值以及Ki-67LI指数均值明显低于MSI阴性大肠腺瘤患者的PCNALI指数均值以及Ki-67LI指数均值。（P＜0.05）具有统计学意义。结论结直肠癌发生的早期分子改变就是微卫星不稳定性的表现，MSI阳性结直肠癌细胞增殖活性较低。
关键词：大肠腺瘤；微卫星不稳定性；细胞增殖
肿瘤遗传学研究表明，影响细胞恶化转化的因素有遗传物质的不稳定性[1]。导致遗传物质的不稳定性的主要原因是错配修复基因突变。错配修复基因突变或者是错配修复基因功能异常会对DNA复制精确性产生影响，导致DNA复制精确性降低，这样会影响微卫星DNA改变。临床研究表明，微卫星不稳定性（microsatelliteinstability，MSI）的发生与错配修复基因错配有一定的联系[2]。但是，目前在临床研究中还不明确大肠腺瘤及其癌变微卫星不稳定性与细胞增殖的具体联系。本文分析了大肠腺瘤及其癌变微卫星不稳定性与细胞增殖，现报道如下。
1一般资料与方法
1.1一般资料
选取2015年1月-2016年12月我院收治的大肠腺瘤患者30例，年龄为25-72岁，平均年龄（41.2±10.34）岁，在30例大肠腺瘤患者中有不典型增生Ⅰ级10例，不典型增生Ⅱ级10例，不典型增生Ⅲ级10例。大肠腺瘤癌变患者20例，年龄为26-73岁，平均年龄（45.2±10.12）岁。所有患者及其家属均对本次研究知情同意，并表示愿意配合。
1.2方法
1.2.1MSI检测方法首先是DNA提取，采用微切割技术采集大肠腺癌、腺瘤癌变以及正常的大肠肠黏膜组织。再通过蛋白酶K消化法对DNA进行提取。DNA提取完成之后，进行PCR扩增与分析，采用PCR仪扩增，对视引物设定不同的循环参数，具体参数有：35s-60s，90℃、35s-60s，45℃，循环40次左右。将扩增物加入到变性聚丙烯酰胺凝胶孔中，经过5小时的电泳后，将凝胶银染显色取下。判定标准，在一例标本之中，肿瘤组织和肿瘤组织相对应的正常组进行比较，其中如果等位片段出现了缺失则判定MSI为阳性，如果出现额外的DNA片段则判定MSI为阳性[3]。
1.2.2免疫组化染色免疫组化染色染色法，主要是进行抗PCNA和Ki-67单克隆抗体染色，DAB显色。判定标准是PCNA标记指数和Ki-67标记指数[4]。
1.3统计学分析
将研究所得的最后数据使用spss22.0统计学软件进行数据处理。在数据处理过程中，t值用以检验计量资料，卡方用以检验计数资料，组间差异经P值进行判定，（P＜0.05）具有统计学意义。
2结果
2.1大肠腺瘤及其癌变微卫星的检出率
对大肠腺瘤患者30例，大肠腺瘤癌变患者20例，共50例患者进行检测后发现，其中共检测出MSI11例，MSI的发生率为22.00%，有3例发生微卫星位点，微卫星位点的发生率为6.00%，这三例发生微卫星位点的患者中有两例癌变，有1例腺瘤?级不典型增生。其中有13例都是2个或2个以上位点发生MSI，发生率为26.00%。
2.2大肠腺瘤及其癌变的MSI与细胞增殖的关系
大肠腺瘤及其癌变的MSI与细胞增殖的关系如表1所示
表1大肠腺瘤及其癌变的MSI与细胞增殖的关系
根据表2可知，大肠腺瘤及其癌变组织共检测出7例MSI，这7例MSI阳性大肠腺瘤患者的PCNALI指数均值以及Ki-67LI指数均值明显低于MSI阴性大肠腺瘤患者的PCNALI指数均值以及Ki-67LI指数均值。（P＜0.05）具有统计学意义。
3.讨论
在真核细胞基因组中存在微卫星DNA，微卫星DNA在真核细胞基因组中的表现形式是二核苷酸重复序列[5]。微卫星不稳定性就是指，序列复制出现问题从而导致重复序列出现缺失、扩增等改变，具体表现就是肿瘤组织与肿瘤组织相应的正常组织DNA结构的等位基因发生改变。据报道称，微卫星不稳定性多发于肿瘤。
本次研究对大肠腺瘤患者30例，大肠腺瘤癌变患者20例，共50例患者进行检测后发现，研究结果表明，共检测出MSI11例，MSI的发生率为22.00%，有3例发生微卫星位点，微卫星位点的发生率为6.00%，这三例发生微卫星位点的患者中有两例癌变，有1例腺瘤?级不典型增生。其中有13例都是2个或2个以上位点发生MSI，发生率为26.00%；大肠腺瘤及其癌变组织共检测出7例MSI，这7例MSI阳性大肠腺瘤患者的PCNALI指数均值以及Ki-67LI指数均值明显低于MSI阴性大肠腺瘤患者的PCNALI指数均值以及Ki-67LI指数均值。
综上所述，结直肠癌发生的早期分子改变就是微卫星不稳定性的表现，MSI阳性结直肠癌细胞增殖活性较低。
参考文献
[1]周琪，阎晓初，梁后杰，周进明，吴峰，柳凤轩.大肠腺瘤及其癌变微卫星不稳定性与细胞增殖的研究[J].现代肿瘤医学，2007，11：1622-1625.
[2]吴保平，张亚历，张振书，周殿元，高春芳，郭文，张立力.结肠癌微卫星不稳定性与错配修复基因表达及细胞增殖活性关系的研究[J].中华消化杂志，2001，05：52-53.
[3]陈国庭，朱正纲，尹浩然，计骏，刘炳亚，林言箴.胃癌微卫星不稳定性及其与转录因子E2F4基因突变关系的研究[J].中华消化杂志，2002，11：54-55.
[4]陈易华，侯建新，汪盛贤，简燚，杨大春，刘德芳.大肠癌组织中p27蛋白表达与微卫星不稳定性的关系[J].实用癌症杂志，2004，06：576-578+594.
[5]吴保平，张亚历，张立力，张振书，周殿元.家族背景大肠癌微卫星不稳定性、错配修复基因表达的研究[J].现代消化病及内镜杂志，1998，03：206-211.