T细胞免疫对结肠癌浸润作用的初探

论文摘要

研究背景：结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,我国的结肠癌发病率呈明显上升趋势。近年来人们开始关注结肠癌的微环境免疫,发现结肠癌患者的预后与原发肿瘤微环境的免疫相关。肿瘤微环境中的肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes, TILs）是微环境免疫的重要组成部分,其中T淋巴细胞在肿瘤免疫中发挥重要作用。以往研究对基因改变和肿瘤免疫之间的关系关注很少,但二者并非孤立存在,它们之间的复杂关系还有待于进一步探讨。研究目的：1.探讨结肠癌微环境中肿瘤浸润T细胞（包括CD4+T细胞,CD8+T细胞,CD45RO+T细胞,Treg,Th1细胞）分布表达情况,及其与临床和病理特征的关系。2.初探结肠癌微环境中调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）形成及作用机制,包括：（1）肿瘤浸润树突状细胞、巨噬细胞对Treg形成分布的影响。（2）结肠癌微环境中Treg是否通过颗粒酶B发挥细胞毒作用。3.探讨K-ras基因突变对结肠癌微环境中肿瘤浸润T细胞的影响材料与方法：选取27例手术切除的结肠癌标本,配对肿瘤组织（避开坏死和出血区域）和癌旁组织。采用免疫组织化学染色方法,检测CD、CD8、CD45RO、Treg （FOXP3）、Th1（T-bet）表达及分布情况；分析肿瘤浸润T细胞各群的分布和表达,以及与患者临床和病理特点的相关性。采用免疫组织化学染色方法,检测肿瘤浸润树突状细胞、巨噬细胞和颗粒酶B的分布表达,分析Treg （FOXP3）表达与肿瘤浸润树突状细胞（S-100）、巨噬细胞（CD68）、颗粒酶B的相关性。显微切割结肠癌组织,提取DNA, PCR扩增K-ras基因,测序鉴定K-ras基因突变。分析K-ras基因突变与肿瘤浸润T细胞分布表达之间的相关性。实验结果：（1）结肠癌微环境中CD4+T细胞、CD45RO+T细胞、Th1（T-bet）在肿瘤组织中表达数量低于癌旁组织（均满足P<0.001）,Treg （FOXP3）表达在肿瘤组织中高于癌旁组织（P<0.001）。结肠癌组织的FOXP3/T-bet值高于癌旁组织（P<0.001）,而CD8/FOXP3值低于癌旁组织（P=0.021）。（2）结肠癌组织CD4+T细胞、CD45RO+T细胞、FOXP3和T-bet阳性表达与患者临床病理特点均无显著相关性（P>0.05）。癌旁组织CD8+T细胞数量在非血管浸润组高于血管浸润组（P<0.001）。癌旁组织T-bet表达在临床分期Ⅰ和Ⅱ组高于Ⅲ和Ⅳ组（P=0.002）,在Duke分期A、B和C+D各组间存在差异,表达随分期增高而减少（P=0.011）。（3）结肠癌中S-100蛋白表达在肿瘤组织显著高于癌旁组织（P<0.001）。肿瘤组织S-100蛋白的表达与FOXP3表达相关（r=0.839,P<0.001）。颗粒酶B表达在癌旁显著高于肿瘤组织（P<0.001）,肿瘤组织颗粒酶B表达在非血管浸润组高于血管浸润组（P<0.001）。颗粒酶B表达与FOXP3无相关性（P>0.05）（4）19例结肠癌组织中K-ras基因突变率为42.11%,K-ras基因突变与非突变组相比,结肠癌浸润T淋巴细胞表达无统计学差异（P>0.05）。小结：（1） CD4+T细胞、CD45RO+T细胞和Th1细胞（T-bet）在结肠癌组织中表达低于癌旁组织,而Treg（FOXP3）却与之相反。（2） FOXP3/T-bet在肿瘤组织中高于癌旁组织,而CD8/FOXP3在肿瘤组织表达低于癌旁组织。（3）结肠癌微环境中S-100蛋白表达与FOXP3呈正相关,而颗粒酶B与FOXP3表达无相关性。结论：（1）肿瘤浸润T细胞（包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD45RO+T细胞、Treg和Thl细胞）构成了结肠癌肿瘤微环境,其中肿瘤组织中以负向免疫调节占优势,而癌旁组织以正向免疫为主导。（2）结肠癌微环境中树突状细胞可能参与了Treg形成的调控机制。而肿瘤巨噬细胞（CD68）与结肠癌微环境Treg细胞的形成无关。颗粒酶B并没有参与Treg细胞调控免疫逃逸的机制。（3） K-ras基因突变对结肠癌组织浸润T细胞表达无影响。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 结肠癌微环境中肿瘤浸润T细胞的分布表达情况
• 方法流程
• 实验对象
• 临床资料收集
• 试剂
• 试剂配方
• 主要仪器和设备
• 实验方法步骤
• 免疫组织化学判读方法
• 统计方法
• 实验结果
• 小结
• 讨论
• 结论
• 第二部分 结肠癌肿瘤微环境Treg形成及作用机制初探
• 方法流程
• 实验对象
• 临床资料收集
• 试剂
• 试剂配方
• 主要仪器和设备
• 实验方法
• 免疫组织化学判断方法
• 统计方法
• 实验结果
• 小结
• 讨论
• 结论
• 第三部分 K-ras基因突变对结肠癌浸润T细胞的影响
• 方法流程
• 材料
• 试剂
• 试剂配方
• 主要仪器和设备
• 实验方法步骤
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历