论文摘要
博莱霉素是1966年日本的梅泽滨夫等人首先从轮枝链霉菌（Streptomycesverticillus）的发酵产物中发现的。它是一种糖肽类的抗肿瘤抗生素。自被发现以来,已广泛用于鳞状细胞癌、恶性淋巴瘤、睾丸癌及卵巢癌等的联合化疗中。博莱霉素有着独特的结构和性质,能够介导激活分子氧,并序列选择性降解DNA,且不会引起骨髓抑制和免疫抑制,这在抗肿瘤药物中是非常有吸引力的。但是博莱霉素能够剂量依赖性的导致肺纤维化,使其临床应用受到一定的限制。因此,寻找高效低毒的博莱霉素族新化合物成为研究的一个热点。我们在博莱霉素族化合物的筛选过程中,从轮枝链霉菌平阳变种（Streptomycesverticillus var.pingyangensis n.var）-Q835的发酵液中发现了一个新的组分,通过离子交换树脂、大孔吸附树脂和CM-Sephadex C-25葡聚糖凝胶[NH4+]型柱层析分离纯化得到此新活性组分纯品;经各种光谱学分析手段（IR、UV、ESI-Q-TOF2-MS、NMR）确定其具有与博莱霉素相同的母核结构,但末端侧链不同,并被确证为amidepropyl spermidine,经查新确定为一博莱霉素族的新化合物,遂将其命名为NC0604。对NC0604的抗菌谱进行了研究,发现其具有广谱抗菌活性,并且对一些杆菌类及革兰氏阴性菌表现出较好的抗菌活性。通过MTT法和克隆形成率法检测了NC0604的体外抗肿瘤活性,发现其抗瘤谱广、抗肿瘤作用好,对人肝癌HepG2细胞、人口腔上皮癌KB细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人大肠癌HCT116细胞、人胃癌BGC-823细胞及人乳腺癌耐药细胞MCF-7/DOX等都表现出了优于博莱霉素的抗肿瘤活性。用雌性Babl/c小鼠皮下接种鼠肝癌H22细胞进行体内抗肿瘤活性实验,结果显示,在10mg·kg-1、5mg·kg-1和2mg·kg-1三个给药剂量下,博莱霉素对鼠肝癌H22的抑制率分别为75.96%、59.01%和47.41%;而NC0604对鼠肝癌H22的抑制率分别为91.45%、79.69%和69.97%。NC0604在10mg·kg-1、5mg·kg-1、2mg·kg-1三个剂量时对鼠肝癌H22的抑制率分别为同剂量博莱霉素的1.20倍、1.35倍和1.48倍。用雄性昆明种小鼠检测了NC0604的肺毒性,通过生化指标检测即肺组织中羟脯氨酸（HYP）含量测定和观察肺组织病理切片的形态学变化评价了NC0604的肺毒性情况,并与博莱霉素族的其他几个化合物进行了比较,证明NC0604的肺毒性比博宁霉素略强,但明显低于博莱霉素、平阳霉素和博安霉素。对NC0604抗肿瘤作用的分子机理进行了初步的研究。发现NC0604能引起HepG2细胞活性氧自由基增加和细胞线粒体膜电位功能障碍,并将细胞周期阻断于G2/M期。NC0604处理过的HepG2细胞通过Hochest 33342染色后在荧光显微镜下能观察到具有凋亡特征的染色质凝集,并通过凋亡相关的蛋白分子检测进一步表明NC0604具有体外诱导肿瘤细胞凋亡的作用。由此提示NC0604抗肿瘤作用的机制可能与其诱导肿瘤细胞ROS增加、线粒体膜电位障碍及进而诱导细胞凋亡有关。博莱霉素族化合物的抗肿瘤作用比较独特,而该族化合物的各成员的抗肿瘤作用及机制也各有特点,对于NC0604作用机制,仍需进行更深入的研究与探索。