以中药为基质的灰树花发酵工艺条件的研究

论文摘要

灰树花是一种食、药两用真菌,其代谢产物胞外多糖具有抗肿瘤、提高机体免疫力的药理活性。本研究主要是向灰树花液体发酵培养基中添加苦荞、天麻等六种贵州特色中药资源,考察它们对灰树花胞外多糖产量的影响。1、论文研究表明:药用真菌灰树花可在代谢过程中转化中药的有效成分,提高中药活性成分在复合制剂中的比例及效价;此外,中药中的某些成分能够促进药用真菌的生长或活性产物的产生,从而提高灰树花胞外多糖的产量。2、灰树花胞外多糖提取工艺:取100mL发酵液,离心（4000r/min 20min）,向上清液中加入95%酒精到乙醇浓度为30%,4℃冰箱过夜,离心（4000r/min,1min）,弃去沉淀,上清液继续追加95%酒精到乙醇浓度达75%,4℃冰箱过夜,离心（40000r/min,1min）得沉淀烘干至恒重,即为灰树花胞外多糖。3、灰树花液体发酵培养基:葡萄糖30g/L,蛋白胨5g/L,KH2PO44g/L,MgSO41g/L;摇瓶发酵培养条件:初始pH自然,接种量10%,种龄5d,温度25℃,250ml三角瓶装液量100ml,转速150r/min。4、在灰树花深层发酵培养基中,当苦荞、天麻、山药的乙醇提液添加量分别为6g/L,6g/L,8g/L时,灰树花胞外多糖产量最高,分别为:3.28g/L、2.31g/L、3.42g/L。5、将苦荞、天麻、山药的乙醇提取液两两组合,添加到灰树花发酵培养基中,得苦荞、天麻组合比例1:2时,胞外多糖产量为3.96g/L。6、应用响应曲面法对试验数据进行分析得出:在灰树花发酵液体培养基中,添加的苦荞乙醇提取液质量浓度为3.0801g/L,天麻乙醇提取液质量浓度为9.4019g/L,山药乙醇提取液质量浓度为7.8856g/L时,灰树花胞外多糖产量最高,达4.6052g/L,较好的解决了灰树花胞外多糖产量较低的问题。

论文目录

• 目录
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 立题背景
• 1.1.1 人类生命的严重威胁——肿瘤
• 1.1.2 新型抗肿瘤免疫调节剂——真菌多糖
• 1.2 国内外对灰树花多糖的研究概况
• 1.2.1 灰树花子实体多糖
• 1.2.2 灰树花菌丝体多糖
• 1.3 立题意义
• 1.3.1 灰树花的食用价值
• 1.3.2 灰树花的药用价值
• 1.3.3 灰树花多糖的药理及临床作用
• 1.4 研究背景与主要研究内容
• 1.4.1 贵州六种特色资源物质功能
• 1.4.2 本论文的主要研究内容
• 第二章 灰树花胞外多糖提取工艺的研究
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 菌种
• 2.2.2 主要药品
• 2.2.3 主要仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 培养基的配制
• 2.3.2 培养方法
• 2.3.3 灰树花胞外多糖提取工艺流程
• 2.3.4 乙醇浓度对胞外多糖得率的影响
• 2.3.5 温度对胞外多糖得率的影响
• 2.4 胞外多糖得率的计算
• 2.5 结果与讨论
• 2.5.1 乙醇浓度对灰树花胞外多糖得率的影响
• 2.5.2 温度对灰树花胞外多糖得率的影响
• 2.6 本章小结
• 第三章 灰树花摇瓶发酵工艺的研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料
• 3.2.1 菌种
• 3.2.2 主要药品
• 3.2.3 主要仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 培养基的配制
• 3.3.2 培养方法
• 3.3.3 液体菌种营养条件的优化
• 3.3.4 液体菌种发酵条件的优化
• 3.4 分析方法
• 3.4.1 生物量的测定
• 3.4.2 pH值测定
• 3.4.3 胞外多糖含量测定及计算
• 3.4.3.1 胞外多糖的测定
• 3.4.3.2 胞外粗多糖的计算
• 3.4.4 3，5——二硝基水杨酸比色法测定还原糖
• 3.4.5 苯酚——硫酸法测总糖
• 3.5 结果与讨论
• 3.5.1 还原糖标准曲线的绘制
• 3.5.2 总糖标准曲线的绘制
• 3.5.3 PDA培养基上种子的生长情况
• 3.5.4 灰树花一级种子生长曲线及种龄对发酵的影响
• 3.5.5 灰树花营养条件的研究
• 3.5.5.1 碳源对灰树花深层发酵的影响
• 3.5.5.2 氮源对灰树花深层发酵的影响
• 3.5.5.3 无机盐对灰树花深层发酵的影响
• 3.5.5.4 正交试验优化培养基组成
• 3.5.6 灰树花摇瓶发酵条件的优化
• 3.5.6.1 培养温度对灰树花液体发酵的影响
• 3.5.6.2 接种量对灰树花液体发酵的影响
• 3.5.6.3 初始pH对灰树花液体发酵的影响
• 3.5.6.4 装液量对灰树花液体发酵的影响
• 3.5.7 摇瓶发酵过程分析
• 3.6 本章小结
• 第四章 以中药为基质的灰树花摇瓶发酵工艺的研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料
• 4.2.1 菌种
• 4.2.2 主要药品
• 4.2.3 主要仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 培养基的配制
• 4.3.2 培养方法
• 4.3.3 原料提取液的制备
• 4.4 分析方法
• 4.4.1 生物量的测定
• 4.4.2 胞外粗多糖测定及计算
• 4.4.3 原料水（乙醇）提取液质量浓度的计算
• 4.4.4 数理统计方法
• 4.5 结果与讨论
• 4.5.1 中药水取提液和乙醇提取液对灰树花深层发酵的影响
• 4.5.1.1 六种贵州特色中药资源水提取液对灰树花深层发酵的影响
• 4.5.1.2 六种贵州特色中药资源乙醇提取液对灰树花深层发酵的影响
• 4.5.2 中药乙醇提取液质量浓度对灰树花深层发酵的影响
• 4.5.3 苦荞、天麻、山药组合对灰树花液体深层发酵的影响
• 4.5.3.1 两种贵州特色中药资源组合对灰树花深层发酵的影响
• 4.5.3.2 响应面法优化三种贵州特色中药资源组合
• 4.6 本章小结
• 第五章 总结与展望
• 5.1 总结
• 5.2 论文创新点
• 5.3 展望
• 致谢
• 参考文献
• 研究生期间发表论文