论文摘要
原发性肝癌（HCC），简称肝癌，是一种高致命性恶性肿瘤。除早期肝癌患者外，绝大多数肝癌患者存活期不超过1年。常规治疗方法除对部分早期肝癌患者有效外，对绝大多少中晚期肝癌患者疗效甚微。肿瘤基因治疗作为一种新的治疗理念，一经出现就引起研究人员的高度重视。目的：安全、高效、靶向性好的载体是肿瘤基因治疗的关键。本研究利用人源基因载体结合人巨细胞病毒增强子（CMVe），人端粒酶逆转录酶启动子（hTERTp）及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体，研究他们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能。方法：我们将CMVe与肿瘤特异性启动子hTERTp组合，分别结合GFP及精氨酸型和脯氨酸型肿瘤抑制基因p53，构建GFP表达载体pchEGFP以及p53表达载体pchp53Arg和pchp53Pro；脂质体2000转染肝癌细胞株Bel-7402；24h后利用荧光显微镜以及流式细胞仪检测GFP的表达；RT-PCR、Western blotting检测p53基因的表达；利用HOECHST 33258、ANNEXIN V-FITC／PI染色，检测p53在肿瘤细胞的促凋亡情况。结果：GFP荧光表达载体在Bel-7402细胞中能有效表达；RT-PCR及Western blot检测到精氨酸型和脯氨酸型p53基因在Bel-7402细胞内表达；HOECHST33258染色及ANNEXIN V／PI染色检测细胞凋亡实验没有得到明显的细胞调亡结果。结论：本实验构建的肿瘤抑制载体在肝癌细胞Bel-7402能有效表达，并能形成外源性p53蛋白，但没有检测到明显的p53促使肝癌细胞调亡的结果。这可能与p53对hTERTp的负调控作用有关。
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标签：人源基因载体论文; 人端粒酶逆转录酶启动子论文; 肿瘤抑制基因论文;