论文摘要
目的:角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）因常使角膜的透明性丧失,引起严重视力障碍,而成为重要的致盲眼病之一。角膜的化学烧伤,特别是碱烧伤容易诱发角膜新生血管生成,而角膜新生血管的治疗十分棘手,故近年来抑制角膜新生血管药物的研究越来越被人们所关注。苏拉明（suramin）是一种水溶性的化学合成药物,能够与生长因子受体结合,阻断生长因子与靶细胞结合,从而起到抑制生长因子的作用。近年来对苏拉明抑制体外培养的视网膜色素上皮细胞及增加抗青光眼术后疗效的研究已有报道,但对抑制角膜新生血管的研究尚未见诸报端。为了进一步探讨苏拉明对新生血管的抑制作用,本实验拟将苏拉明用于兔角膜碱烧伤新生血管模型,观察新生血管情况,并对血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、胰岛素样生长因子-Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ）的表达进行分析,旨在研究其二者与角膜碱烧伤后新生血管的关系,并探讨苏拉明对新生血管的抑制作用,以期为今后治疗角膜新生血管提供实验依据。方法:选用新西兰大白兔48只,将实验动物随机分为3组:空白组、对照组、治疗组。每组各16只动物,计32只眼。对照组与治疗组动物制备角膜碱烧伤模型,治疗组自术日起给予8g/L苏拉明溶液点眼,4次/日,每次1滴;对照组自术日起给予氯霉素眼水点眼,4次/日,每次1滴。用裂隙灯显微镜分别于烧伤后1、4、7、14天时观察三组动物角膜新生血管生长情况,并用数码相机照相,测量长入角膜的新生血管长度。三组动物分别于烧伤后1、4、7、14天各随机选取4只空气栓塞处死,迅速摘取双眼球,剪下角膜组织,其中1/2用于HE染色和免疫组化分析VEGF与IGF-Ⅰ含量,其余部分制备透射电镜标本。对图象中的阳性反应部位进行光密度分析,用透射电镜观察照相,新生血管面积、VEGF与IGF-Ⅰ表达的半定量测定结果均以x±s表示,用SPSS12.0统计软件分析。结果:1.裂隙灯显微镜观察及数码照相:术后对照组与治疗组各动物角膜碱烧伤区即出现水肿、浑浊。对照组:术后第1天结膜充血明显,角膜缘处血管充盈,炎症反应较明显,分泌物较多;第3天角膜缘处有新生血管芽呈刷状生长,向角膜中央生长,生长迅速;第7天新生血管长度已达烧伤区,角膜仍水肿浑浊;第14天新生血管管径减小,蔓延面积增加。治疗组:术后第1天结膜中度充血,角膜缘处血管稍充盈,炎症反应较轻;第3天角膜缘处部分区域有新生血管芽,生长缓慢;第7天新生血管长度达烧伤区边缘;第14天新生血管颜色变浅,面积稍增加。空白组:未见任何变化。2.角膜新生血管面积计算:术后第1天各组均无新生血管生长。术后第4、7、14天,空白组未出现角膜新生血管,对照组与治疗组均有角膜新生血管生长,且治疗组角膜新生血管面积较对照组减少,在统计学上有显著性差异（P<0.01）。3.角膜组织VEGF与IGF-Ⅰ的免疫组织化学分析:空白组VEGF、IGF-Ⅰ的表达无明显变化。对照组与治疗组术后第1天角膜上皮层VEGF、IGF-Ⅰ的表达增高;第4天VEGF、IGF-Ⅰ的表达明显增高,基质层内亦出现高表达;第7天,角膜VEGF、IGF-Ⅰ的表达水平降低,直至第14天基本降至正常水平。在第1、4、7天,对照组与治疗组的VEGF、IGF-Ⅰ的表达均比空白组增多,在统计学上有显著性差异（P<0.01）,但治疗组较对照组减少,在统计学上有显著性差异（P<0.01）。第14天,三组无显著性差异（P>0.05）。同时证实VEGF、IGF-Ⅰ的表达呈直线正相关关系。4.组织病理学改变:4.1光镜下观察:空白组各标本角膜上皮完整,细胞排列整齐规则,上皮细胞间少见炎症细胞浸润。对照组:术后第1天,角膜上皮不完整,细胞排列紊乱,上皮细胞间可见大量炎症细胞浸润;术后第4天,炎症细胞增多,角膜缘处出现大量新生血管,管径较大。术后第7天,角膜上皮层完整,仍有大量炎症细胞浸润,基质层可见大量新生血管,较成熟,;术后第14天,炎症细胞有所减少,基质层大量成熟新生血管,管径减小。治疗组:术后第1天,角膜上皮不完整,上皮细胞间可见炎症细胞浸润;术后第4天,角膜上皮层细胞排列尚整齐,上皮间及基质层可见炎症细胞,角膜缘处出现新生血管,管径稍大;术后第7天,角膜上皮层完整,有少量炎症细胞浸润,基质层可见新生血管,较成熟,管腔较小;术后第14天,角膜上皮细胞排列整齐,炎症细胞减少,基质层可见成熟新生血管,管腔狭窄。电镜下观察:第7天,空白组:角膜上皮层游离面微绒毛较多,细胞间隙可,细胞间的桥粒与半桥粒连接较多,细胞质内线粒体正常。对照组:角膜上皮层游离面微绒毛明显减少,细胞间隙明显增宽,桥粒与半桥粒连接明显减少,细胞质内线粒体大部分嵴和膜融合或消失,粗面内质网显著扩张,脱颗粒现象明显。治疗组:角膜上皮层游离面微绒毛稍减少,细胞间隙增宽,桥粒与半桥粒连接稍减少,细胞质内线粒体少部分嵴和膜融合或消失,有脱颗粒现象。结论:1.VEGF与IGF-Ⅰ促进角膜碱烧伤新生血管的形成且二者呈直线正相关2.苏拉明能够抑制角膜碱烧伤新生血管的形成3.苏拉明能够促进角膜损伤后上皮的修复
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