HCV亚基因复制子QSG7701细胞株的建立及CTE-核酶对HCVRNA复制的影响

论文摘要

目的建立RNA转染的HCV Subgenomic Replicon（HCV亚基因复制子）稳定转染和表达的细胞株;探讨CTE-核酶对丙型肝炎病毒亚基因组RNA复制的影响。研究方法1.在T7体外转录RNA试剂盒介导下,将含有HCVSubgenomic Replicon的质粒pHCV BM4-5转化为RNA。2.建立HCV Subgenomic Replicon稳定转染和表达的细胞株在脂质体lipofectamine TM2000介导下,将含有HCV SubgenomicReplicon的RNA导入人肝癌细胞系QSG7701中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立转染克隆细胞系。用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹法证实HCV Subgenomic Replicon RNA复制及其蛋白表达。3.观察普通核酶pPHCV5-R1、pPHCV5-R2和CTE-核酶pPHCV5-CR1、pPHCV5-CR2瞬时转染含HCV亚基因复制子QSG7701。48小时后收集细胞,提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法,观察核酶对HCV5’-NCR切割效果。结果1.经RT-PCR和Western Blot证实,成功建立HCV SubgenomicReplicon RNA稳定转染QSG7701细胞株。2.经RT-PCR证实:pPHCV5-CR1转染组未见明显HCV5’-NCR扩增目的条带,pPHCV5-R1转染组可见扩增目的条带,亮度低于未转染组;pPHCV5-CR2转染组可见扩增目的条带,亮度低于未转染组,pPHCV5-R2转染组可见扩增目的条带,亮度与未转染组接近。这些结果提示:CTE-核酶在细胞内的切割靶RNA的效率明显高于普通核酶。普通核酶难以切割的位点,CTE-核酶能进行有效的切割;普通核酶能进行切割的位点,带CTE-核酶的切割效率明显提高。结论1.成功建立HCV Subgenomic Replicon QSG7701细胞株。2.CTE-核酶在细胞内切割HCVRNA的效率明显高于普通核酶。普通核酶难以切割的位点,CTE-核酶也能进行有效的切割;普通核酶能进行切割的位点,带CTE-核酶的切割效率明显提高。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英汉缩略词对照表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 第三章 结果
• 3.1 试管内转录HCV Subgenomic Replicon RNA
• 3.2 QSG7701 HCV Subgenomic Replicon细胞建立
• 3.3 CTE-核酶对HCV Subgenomic Replicon RNA复制影响
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 第六章 综述
• 致谢