一株海洋放线菌抗生物质的分离和结构初步分析

论文摘要

对厦门周边海域采集的样品采用稀释涂平板法分离、纯化、保藏各种海洋微生物，对筛选出的一株具有广谱抗菌活性的海洋放线菌进行研究，经过形态特征、培养特征、生理生化特征及16S rDNA鉴定为达松维尔拟诺卡菌。为了提高抗菌物质的产量，采用响应面法对DY2242菌株的发酵培养基进行优化。首先利用单因素实验考查了不同介质、碳源、氮源对菌株DY2242的影响，在此基础上运用Plackett-Burman试验设计方法筛选出影响产抗菌物质的三个主要因素：NaCl、麦芽糖和NaNO3浓度。用最陡爬坡实验逼近最大响应区域，再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析方法确定主要因素的最优浓度：氯化钠浓度为2.08%，麦芽糖浓度为3.08%，NaNO3浓度为0.875%。在培养基的优化条件下，抗菌物质的抑菌圈直径由最初的25.5mm上升到31mm，增加约24%。此后，再对发酵条件进行优化，表明起始最佳pH7.0，最佳接种菌龄72h，最佳接种量5%，最佳装液量为70ml（250ml三角瓶），最佳培养温度为28℃，最佳培养时间5天，在此培养条件下进行发酵，抗菌物质的抑菌圈直径由最初的25.5mm上升到33.5mm，增加约31.4%。通过菌株DY2242抗菌物质稳定性的实验，表明其对UV、pH均具有较好的稳定性，抗菌物质在高于100℃时部分失活。通过Sephadex LH-20柱色谱分离后，经抗菌活性检测发现一个较强的活性峰。将此峰的洗脱液各组分进行薄层色谱分析，选取斑点清晰且单一的组分进行气相色谱-质谱联用分析，总离子流图表明该组分成分单一，根据质谱图谱与标准谱库比对，初步判断该组分为邻苯二甲酸二丁酯（DBP）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1 引言
• 1.1 研究意义和理论依据
• 1.2 本实验拟解决的问题
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 仪器设备和试剂
• 2.1.2 菌种
• 2.1.3 培养基
• 2.2 方法
• 2.2.1 抗菌活性菌株筛选
• 2.2.2 抗菌活性的测定
• 2.2.3 放线菌 DY2242 的鉴定
• 2.2.4 放线菌 DY2242 分子鉴定
• 2.2.5 菌株 DY2242 发酵培养基优化
• 2.2.6 菌株 DY2242 发酵条件的优化
• 2.2.7 DY2242 抗菌谱的测定
• 2.2.8 发酵液抗菌物质稳定性试验
• 2.2.9 抗菌物质的分离、纯化和鉴定
• 3 结果与分析
• 3.1 抗菌活性菌株的筛选
• 3.2 放线菌 DY2242 的鉴定
• 3.2.1 放线菌 DY2242 的形态观察
• 3.2.2 放线菌 DY2242 的培养特征
• 3.2.3 DY2242 生理生化特性
• 3.2.4 DY224216S rDNA 鉴定
• 3.3 菌株 DY2242 发酵培养基优化
• 3.3.1 单因素优化培养介质、碳、氮源
• 3.3.2 Plackett-Burman 试验筛选重要因素
• 3.3.3 最陡爬坡实验
• 3.3.4 响应面设计最优培养基组成
• 3.4 菌株 DY2242 发酵条件的优化
• 3.4.1 pH 对抗菌物质抑菌效果的影响
• 3.4.2 接种菌龄对抗菌物质产量的影响
• 3.4.3 接种量对抗菌物质抑菌效果的影响
• 3.4.4 装液量对抗菌物质抑菌效果的影响
• 3.4.5 发酵温度对抗菌物质抑菌效果的影响
• 3.4.6 发酵条件优化前后对比
• 3.5 DY2242 抗菌谱的测定
• 3.6 发酵液抗菌物质稳定性试验
• 3.6.1 pH 稳定性
• 3.6.2 UV 稳定性
• 3.6.3 热稳定性
• 3.7 抗菌物质的分离、纯化和鉴定
• 3.7.1 葡聚糖凝胶 Sephadex LH-20 柱色谱分离各组分的抑菌活性
• 3.7.2 活性成分分析结果
• 4 讨论
• 4.1 放线菌 DY2242 菌种鉴定
• 4.2 放线菌 DY2242 的发酵条件的优化
• 4.3 菌株 DY2242 抗菌物质稳定性研究
• 4.4 菌株 DY2242 活性成分的研究
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 在读期间发表的学术论文