胰腺癌中XIAP的表达意义及RNAi抑制其表达对化疗敏感性的影响

论文摘要

目的 胰腺癌是腹部外科最常见的恶性肿瘤之一，手术切除率低，对化疗药物普遍耐药，临床治疗效果差。X-连锁的凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）参与了多种恶性肿瘤的增殖与转化，并与肿瘤的化疗耐药性密切相关，是凋亡抑制蛋白家族中对凋亡抑制作用最强的一种。本研究通过观察XIAP在胰腺癌组织以及SW1990细胞中的表达情况并分析其与病理分级、临床分期之间的关系，阐明XIAP的高表达与胰腺癌细胞对化疗药物耐药性的相关性；并进一步探讨运用载体介导的RNAi抑制胰腺癌细胞中XIAP表达的可行性，及该方法对改善胰腺癌细胞化疗敏感性的效果。 方法 收集湘雅医院普通外科2002年1月至2004年6月手术切除的胰腺癌组织标本23例，癌旁组织12例，运用免疫组织化学染色方法观察XIAP在胰腺癌组织以及癌旁组织的表达情况，分析XIAP的表达水平与胰腺癌组织的病理分级与临床分期之间的关系。体外培养胰腺癌细胞SW1990，以1.0μg／ml和10μg／ml两种浓度的5-Fu间断处理诱导其对5-Fu的耐药性，运用RT-PCR和Western blot检测SW1990细胞处理前后XIAP表达水平的变化，MTT检测处理前后细胞对的5-Fu药物敏感性，分析XIAP的表达水平与SW1990细胞对5-Fu耐药性之间的关系。构建针对XIAP可形成发卡状结构的小RNA的质粒载体XpRs，转染SW1990细胞，检测其对XIAP的mRNA和蛋白的瞬时抑制效率，通过流式细胞仪和Hoechst33258染色观察化疗药物诱导的细胞凋亡指数的变化。 结果 免疫组化显示胰腺癌和癌旁组织中均有XIAP的阳性表达，癌组织中的表达阳性率为20／23（86.9％），明显高于癌旁正常胰腺组织4／12（33.3％）（P＜0.01），XIAP在胰腺癌组织中的表达水平与肿瘤的临床分期之间无明显关系（P＜0.05），与肿瘤的病理学分级之间有正相关性（P＜0.05）。运用1.0μg／ml和10μg／ml两种浓度的5-Fu间断培养细胞10天后，SW1990对5-Fu的半数有效浓度（IC50）分别由1.445±0.210μg／ml升高至1.797±0.103μg／ml（P＜0.05）和2.125±0.038μg／ml（P＜0.01），培养30天后，细胞对5-Fu的IC50分别为5.030±0.232μg／ml（P＜0.01）和6.368±0.315μg／ml（P＜0.01），XIAP蛋白在药物作用10天时有轻度升高，而mRNA升高不明显；培养30天时，XIAP的mRNA和蛋白均有明显的升高，XIAP

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 XIAP在胰腺癌组织以及细胞中的表达与意义
• 1.1 前言
• 1.2 材料和方法
• 1.2.1 主要试验仪器,设备和试剂
• 1.2.2 试验流程
• 1.2.3 试验方法
• 1.2.4 统计学分析
• 1.3 结果
• 1.3.1 免疫组化
• 1.3.2 SW1990细胞对5—Fu的敏感性的变化
• 1.3.3 XIAP在细胞中的表达的变化
• 1.3.4 XIAP的表达水平与细胞对5-Fu耐药性之间的关系
• 1.4 讨论
• 1.4.1 XIAP在胰腺癌组织中的表达与意义
• 1.4.2 胰腺癌细胞中XIAP的表达与化疗敏感性的关系
• 1.5 结论
• 第二章 RNAi抑制SW1990细胞中XIAP对化疗敏感性的影响
• 2.1 前言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 主要试验仪器,设备和试剂
• 2.2.2 试验流程图
• 2.2.3 试验方法
• 2.2.4 统计学处理
• 2.2.5 方法中涉及的原理附录
• 2.3 结果
• 2.3.1 载体的构建
• 2.3.2 转染条件的摸索
• 2.3.3 转染RNA干扰载体对XIAP的抑制作用
• 2.3.4 运用流式细胞仪检测凋亡的结果
• 2.3.5 转染质粒对化疗药物半数有效浓度（IC50）的影响：
• 2.3.6 Hoechst33258染色结果
• 2.3.7 荧光显微镜下直接计数XIAP抑制后对凋亡率的影响
• 2.4 讨论
• 2.4.1 RNAi对XIAP的抑制作用
• 2.4.2 RNAi对XIAP的抑制效率
• 2.4.3 抑制XIAP后SW1990细胞对化疗敏感性的变化
• 2.5 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果