论文题目: 阿霉素与人血清白蛋白和心肌肌球蛋白的相互作用
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 林爱华
导师: 邹国林
关键词: 阿霉素,人血清白蛋白,心肌肌球蛋白,相互作用
文献来源: 武汉大学
发表年度: 2005
论文摘要: 阿霉素(Adriamycin,ADR,也称作doxorubicin)是从波赛链霉菌(Streptomyces peucetius)中分离得到的一种蒽环类抗癌抗生素,是肿瘤化疗方面最重要的药物之一,对多种恶性肿瘤均有良好的疗效,其静脉给药后,通过与载体HSA的有效结合,经血液循环可到达人体相应部位发挥药效。但是其严重的毒副作用,特别是骨髓抑制和心脏毒性,限制了其在化疗中的广泛应用。本课题主要从ADR与HSA和心肌肌球蛋白的相互作用两个大方面进行了研究,为阐明ADR在体内的转运机制及其严重的心脏毒性的机理提供一定的实验和理论参考。 1、用IAsys光生物传感器研究了ADR以及ADR-Fe(Ⅲ)配合物与HSA的相互作用,结果表明:随温度的升高,ADR与HSA的结合作用逐渐增强,说明温度升高有利于结合反应的进行;相同温度下,ADR-Fe(Ⅲ)配合物与HSA结合的平衡常数是ADR与该蛋白结合常数的7倍;ADR与HSA的结合过程是一个吸热的熵驱动的过程,水分子重组在结合过程中起了重要作用,它们之间的作用力主要为疏水作用力。 2、应用荧光光谱法研究了ADR与HSA的相互作用。首先,研究了pH对ADR与HSA相互作用的影响,发现:在实验的酸度条件下,ADR对HSA的荧光都有猝灭作用;与中性、弱酸和弱碱性环境相比,在pH4.00的强酸性环境中,两者的结合常数明显偏低,结合距离明显偏大;结果表明,ADR与HSA的结合过程中,非辐射能量转移是导致HSA荧光猝灭的原因之一;中性、弱酸和弱碱性环境对两
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第一章 绪论
1 ADR研究概况
1.1 ADR与DNA的结合作用
1.1.1 ADR与DNA的非共价结合作用
1.1.2 ADR与DNA的共价结合作用
1.2 ADR—铁配合物的性质
1.3 ADR介导自由基的产生
1.4 ADR心脏毒性
2 血清白蛋白研究概况
2.1 血清白蛋白的结构
2.2 血清白蛋白的分布
2.3 血清白蛋白的生理功能
2.4 血清白蛋白的光谱性质
3 肌球蛋白的研究概况
3.1 肌球蛋白的结构
3.2 肌球蛋白的性质
3.3 肌球蛋白的功能
3.4 肌球蛋白的提取及酶活测定
4 荧光光谱法在药物与生物大分子相互作用研究中的应用
4.1 药物与蛋白质分子之间的结合常数和结合位点数
4.2 药物与蛋白质分子之间的结合距离
4.3 药物与蛋白质分子的结合部位
4.4 药物与蛋白质分子之间相互作用力的类型
4.5 荧光光谱法在研究药物与血清白蛋白分子之间相互作用的应用
5 光学生物传感器
6 分子对接方法
6.1 分子对接的理论基础
6.2 分子对接方法的分类
6.3 AUTODOCK
7 本课题的选题意义及研究内容
第二章 利用光学生物传感器研究ADR与HSA的相互作用
1 试剂与仪器
2 实验方法
2.1 ADR—Fe(Ⅲ)配合物的制备
2.2 HSA的固定化
2.3 不同温度下，ADR与HSA的相互作用
3 结果与讨论
3.1 HSA的结合量
3.2 数据分析
3.3 热力学分析
第三章 荧光光谱法研究ADR与HSA的相互作用
1 试剂与仪器
2 实验方法
2.1 pH对ADR与HSA相互作用的影响
2.1.1 HSA溶液的配制
2.1.2 ADR与HSA相互作用的荧光光谱的测定
2.1.3 ADR吸收光谱的测定
2.2 不同缓冲体系对ADR与HSA相互作用的影响
2.2.1 HSA溶液的配制
2.2.2 ADR与HSA相互作用的荧光光谱的测定
2.3 温度对ADR与HSA相互作用的影响
2.3.1 HSA溶液的配制
2.3.2 ADR与HSA相互作用的荧光光谱的测定
2.4 离子强度对ADR与HSA相互作用的影响
2.4.1 HSA溶液的配制
2.4.2 ADR与HSA相互作用的荧光光谱的测定
3 结果与讨论
3.1 pH对ADR与HSA相互作用的影响
3.1.1 ADR对HSA荧光的猝灭作用
3.1.2 ADR与HSA作用的荧光猝灭常数
3.1.3 ADR与HSA间的结合距离
3.2 不同缓冲体系对ADR与HSA相互作用的影响
3.3 温度对ADR与HSA相互作用的影响
3.3.1 pH7.41时，温度对ADR与HSA相互作用的影响
3.3.2 pH4.97时，温度对ADR与HSA相互作用的影响
3.4 离子强度对ADR与HSA相互作用的影响
第四章 ADR与修饰后HSA相互作用的研究
1 试剂与仪器
2 实验方法
2.1 HSA溶液的配制
2.2 His残基的化学修饰
2.3 Cys残基的化学修饰
2.4 ADR与修饰后HSA相互作用的荧光光谱的测定
3 结果与讨论
3.1 His修饰对ADR与HSA相互作用的影响
3.2 Cys修饰对ADR与HSA相互作用的影响
第五章 AutoDOCK分子对接模拟ADR与HSA的相互作用
1 AutoDOCK分子对接程序的参数设置
2 AutoDOCK分子对接的实验结果
第六章 心肌肌球蛋白的分离纯化及ATPase活力测定
1 材料、试剂与仪器
2 实验方法
2.1 猪心肌肌球蛋白的提取
2.2 肌球蛋白的纯化—硫酸铵分级沉淀
2.3 肌球蛋白浓度测定
2.4 肌球蛋白及其纯度的鉴定
2.5 肌球蛋白Ca~(2+)—ATPase活力测定
2.5.1 磷标准曲线的制作
2.5.2 肌球蛋白的Ca~(2+)—ATPase活力测定
3 结果
3.1 硫酸铵分级沉淀
3.2 肌球蛋白浓度及含量的测定
3.3 肌球蛋白及其纯度鉴定
3.4 肌球蛋白ATPase活力测定
4 讨论
第七章 ADR与心肌肌球蛋白相互作用的研究
1 材料、试剂与仪器
2 实验方法
2.1 ADR对心肌肌球蛋白Ca~(2+)—ATPase活力的影响
2.2 不同Ca~(2+)浓度下，ADR与心肌肌球蛋白相互作用的荧光光谱的测定
3 结果与讨论
3.1 ADR对心肌肌球蛋白Ca~(2+)—ATPase活力的影响
3.2 Ca~(2+)浓度对ADR与心肌肌球蛋白相互作用的影响
第八章 总结与创新
1 研究工作总结
2 本课题的特色与创新
参考文献
博士研究生期间已发表和待发表的论文
致谢
发布时间: 2006-03-27
参考文献
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