选择性雌激素β受体激动剂对巨噬细胞免疫调节作用及其分子机制

论文摘要

[目的]：雌激素β受体是1996年发现的第二种雌激素受体,近年来,雌激素p受体激动剂在一些如子宫内膜异位症,炎性肠炎等炎症疾病动物模型中观察到一定的治疗作用。虽然具体的机理尚不明确,但是它作为一种抗炎药物的前景受到越来越多的关注。本研究首先观察选择性雌激素p受体激动剂Diarylpropionitrile（DPN）对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型的影响,其次观察DPN对LPS诱导的细胞株巨噬细胞释放炎性因子的影响及DPN对RANTES诱导的巨噬细胞迁移的影响,并探索DPN对炎症通路核转录因子κB （Nuclear Factor-κB, NF-κB）的作用机制,为DPN可能的抗炎作用提供依据。[方法]：用Western Blot的方法检测小鼠腹腔巨噬细胞和小鼠巨噬细胞株RAW264.7上ERβ的蛋白表达；ELISA法检测DPN给药对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞和巨噬细胞株RAW264.7产生炎症因子IL-1β、TNF-α、RANTES的影响；用免疫荧光法检测DPN对LPS刺激的巨噬细胞株RAW264.7炎症通路NF-κB上蛋白p65向核内转移的影响；用Western Blot检测DPN对LPS刺激的巨噬细胞株RAW264.7炎症通路NF-κB上蛋白p65磷酸化水平以及对IκB的降解的影响。[结果]：小鼠腹腔巨噬细胞和巨噬细胞株上均有ERβ的蛋白表达；DPN能显著抑制小鼠腹腔巨噬细胞和巨噬细胞株中LPS刺激的巨噬细胞趋化因子RANTES的表达,但对TNF-α无显著影响。DPN对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β无明显的增强作用,而对巨噬细胞株RAW264.7分泌IL-1p在高浓度时有明显的增强作用。DPN抑制RANTES诱导的RAW264.7的迁移,并能抑制IκB的降解从而抑制P65向核内转移及p65的磷酸化过程,最终抑制炎症通路NF-κB的激活转录。[结论]：ERβ通过抑制巨噬细胞的趋化及分泌趋化因子而影响炎症过程。这种作用可能是通过抑制炎症通路NF-κB的活性而达到。

论文目录

• 缩略词表
• 摘要
• Abstract
• 引言
• 主要材料与试剂
• （一） 实验动物
• （二） 细胞培养主要试剂
• （三） 实验药物与试剂
• （四） 主要溶液及试剂配制
• 主要实验仪器和设备
• 实验方法
• （一） 小鼠腹腔巨噬细胞的提取
• （二） 细胞培养
• （三） 酶联免疫吸附实验（ELISA）
• （四） 细胞趋化实验
• （五） Western Blot
• （六） p65核转移的荧光染色
• （七） 统计分析
• 结果
• 一、小鼠腹腔巨噬细胞及小鼠巨噬细胞株RAW264.7上ERβ的蛋白表达情况
• 二、DPN对小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子表达的影响
• 三、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264.7炎症因子表达的影响
• 四、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264.7迁移的影响
• 五、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264.7中p65向核内转移的影响
• 六、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264.7 p65磷酸化水平的影响
• 七、DPN对小鼠巨噬细胞株RAW264.7 IκB蛋白水平的影响
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 研究方向
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 论文发表