中国南方汉族激素耐药型肾病综合征儿童NPHS2基因突变分析

论文摘要

第一部分中国南方汉族散发性激素耐药型肾病综合征儿童NPHS2基因突变分析目的分析中国南方汉族散发性激素耐药型肾病综合征（steroid-resistantnephrotic syndrome，SRNS）儿童NPHS2基因突变及其特点。方法研究对象为52例中国南方汉族散发性SRNS患儿，对照人群为50例尿检正常的健康志愿者。取所有研究对象外周静脉血3ml，提取基因组DNA；PCR扩增NPHS2基因全部外显子及其周围的部分内含子；应用DNA序列直接测定法对PCR产物进行测序。结果在1例南方汉族散发性SRNS患儿中检出NPHS2基因杂合突变—148C>T（R50W），突变检出率为1.9%。此外，还检出4个已报道的NPHS2基因多态性—102A>G、288C>T、954C>T和1038A>G；它们在52例SRNS患儿中的基因型和等位基因频率与其在50例正常对照人群中的基因型和等位基因频率分别比较，P值均＞0.05。结论中国南方汉族散发性SRNS患儿存在NPHS2基因突变，提示对中国南方汉族散发性SRNS患儿需进行NPHS2基因突变分析。第二部分中国南方汉族家族性激素耐药型肾病综合征家系NPHS2基因突变分析目的分析中国南方汉族家族性激素耐药型肾病综合征（steroid-resistantnephrotic syndrome，SRNS）家系NPHS2基因突变及其特点。方法研究对象为一个中国南方汉族家族性SRNS家系中的先证者及其姐和父母，对照人群为50例尿检正常的健康志愿者。取所有研究对象外周静脉血3ml，提取基因组DNA；PCR扩增NPHS2基因全部外显子及其周围的部分内含子和启动子区全长序列；应用DNA序列直接测定法对PCR产物进行测序。结果本研究在一个中国南方汉族家族性SRNS家系中先证者的NPHS2基因8个外显子和周围部分内含子及启动子区全长未检出致病突变。在先证者及其姐和父母的NPHS2基因外显子1检出1个变异—102A>G（G34G），在NPHS2基因启动子区检出3个变异—-1000A>T、-670C>T和-537-531delCTTTTTT。这4个NPHS2基因变异在50例正常对照人群中均有检出，为已知的NPHS2基因多态性。结论NPHS2基因突变不是本研究南方汉族家族性SRNS家系的主要致病原因。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 1 中国南方汉族散发性激素耐药型肾病综合征儿童 NPHS2 基因突变分析
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 研究对象
• 1.1.2 标本收集
• 1.1.3 引物设计
• 1.1.4 主要仪器
• 1.1.5 主要药品试剂及配制
• 1.2 方法
• 1.2.1 基因组 DNA 的提取与定量
• 1.2.2 PCR 扩增 NPHS2 基因的 8 个外显子
• 1.2.3 DNA 序列测定
• 1.2.4 DNA 序列分析
• 1.2.5 NPHS2 基因变异位点查新
• 1.2.6 应用生物信息学软件对新发现的变异进行致病性预测
• 1.2.7 统计学分析
• 1.3 结果
• 1.3.1 52 例散发性 SRNS 患儿临床病理资料
• 1.3.2 52 例散发性 SRNS 患儿 NPHS2 基因检测结果
• 1.3.3 52 例散发性 SRNS 患儿 NPHS2 基因变异致病性预测结果
• 1.3.4 52 例散发性 SRNS 患儿 NPHS2 基因型和等位基因频率分析
• 1.4 讨论
• 1.5 结论
• 2 中国南方汉族家族性激素耐药型肾病综合征家系 NPHS2 基因突变分析
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 研究对象
• 2.1.2 标本收集
• 2.1.3 引物设计
• 2.1.4 主要仪器
• 2.1.5 主要药品试剂及配制
• 2.2 方法
• 2.2.1 基因组 DNA 的提取与定量
• 2.2.2 PCR 扩增 NPHS2 基因 8 个外显子
• 2.2.3 PCR 扩增 NPHS2 基因启动子区
• 2.2.4 DNA 序列测定
• 2.2.5 DNA 序列分析
• 2.2.6 NPHS2 基因变异位点查新
• 2.3 结果
• 2.3.1 NPHS2 基因 8 个外显子突变分析结果
• 2.3.2 NPHS2 基因启动子区突变分析结果
• 2.4 讨论
• 2.5 结论
• 参考文献
• 附录
• 成果
• 致谢
• 综述
• 参考文献