细粒棘球蚴内蒙株核酸疫苗构建及在真核细胞中的表达

论文摘要

细粒棘球蚴病是由细粒棘球绦虫（Echinociccinae granulosus;Eg）的幼期细粒棘球蚴寄生于人或动物体内所引起的一种重要的人畜共患寄生虫病。不同宿主和地理环境的细粒棘球蚴间存在实质性的基因遗传差异,具有明显的地理株特点。FABP和Eg95是免疫预防细粒棘球蚴病很有前途的疫苗侯选分子。克隆本地虫株的疫苗候选基因构建核酸疫苗对于细粒棘球蚴病的预防具有较好的针对性和特异性。利用PCR技术扩增细粒棘球蚴内蒙株FABP基因,T载体克隆测序。FABP-DNA序列全长482bp,与已报道的国内新疆株FABP-DNA同源性为100%;与国外株FABP-DNA同源性为99%,表明FABP基因具有地理株差异。克隆的FABP-cDNA序列全长402bp,推导ORF为399bp,编码133个氨基酸,序列与由基因DNA序列外显子推导出的编码序列一致,编码蛋白质的分子量为15.095Kda。FABP-cDNA片段亚克隆到原核表达载体pET44a（+）上构建重组质粒pET-FABP,在E.coli BL（21）中诱导表达了预期大小的目的蛋白并纯化,进而免疫小鼠制备了效价高、特异性强的多克隆抗体。利用本研究克隆的细粒棘球蚴内蒙株FABP-cDNA和本实验室保存的EG95-cDNA构建真核表达载体pEGFP-FABP和pEGFP-EG95,转染绵羊胎儿成纤维细胞,结果表明FABP-cDNA和EG95-cDNA可以在真核细胞中与绿色荧光蛋白融合表达。将FABP-cDNA和EG95-cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1（+）上,成功构建核酸疫苗pcDNA3.1-FABP和pcDNA3.1-EG95,转染绵羊胎儿成纤维细胞,RT-PCR检测表明FABP基因和EG95基因在转录水平得到了表达。细粒棘球蚴内蒙株核酸疫苗pcDNA3.1-FABP和pcDNA3.1-EG95构建成功并在真核细胞中得到表达,为应用核酸疫苗预防畜间细粒棘球蚴病奠定了基础,核酸疫苗的研制具有重要的理论价值和潜在的应用前景。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 目录
• 引言
• 参考文献
• 第一章 细粒棘球蚴内蒙株FABP基因的克隆
• 第一节 细粒棘球蚴FABP基因DNA的克隆及分析
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 方法
• 1.1.3 结果
• 1.1.4 讨论
• 参考文献
• 第二节 细粒棘球蚴FABP基因cDNA的克隆及分析
• 1.2.1 材料
• 1.2.2 方法
• 1.2.3 结果
• 1.2.4 讨论
• 参考文献
• 第二章 FABP基因的原核表达及抗体制备
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 参考文献
• 第三章 真核表达载体pEGFP-FABP和pEGFP-EG95的构建及在真核细胞中的表达
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 参考文献
• 第四章 核酸疫苗pcDNA3.1-FABP和pcDNA3.1-EG95的构建及在真核细胞中的表达
• 4.1 材料
• 4.2 方法
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 参考文献
• 结论
• 第五章 核酸疫苗研究进展
• 5.1 核酸疫苗的概念及组成
• 5.2 核酸疫苗的发展简史
• 5.3 核酸疫苗的免疫机理
• 5.4 核酸疫苗的免疫途径
• 5.5 核酸疫苗的优化
• 5.6 核酸疫苗的优点与安全性
• 5.7 寄生虫核酸疫苗的研究
• 5.8 核酸疫苗的应用与前景
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的研究论文