建立于18S rRNA基因测序基础上的锥虫分子分类学研究

论文摘要

利用18S rRNA基因序列分析方法,对我国的湖北、广西、新疆和浙江四省的伊氏锥虫及一株布氏锥虫进行分子分类学研究。用分离的锥虫感染实验动物,自感染小鼠的全血中提取基因组DNA,根据GenBank中己发表的锥虫18S rRNA序列设计一对锥虫通用引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pGEM-Teasy载体中,经酶切PCR确定,进行序列测定,结果显示锥虫七个分离株的18S rRNA基因大小为2188bp左右。利用DNAStar对实验所获得的七株锥虫18SrRNA基因序列与GenBank中部分锥虫的18S rRNA基因进行比较分析,建立两个进化系统发生树。结果发现自我国湖北省、广西省、新疆省以及浙江省分离的伊氏锥虫和一株布氏锥虫病原的18S rRNA基因序列有着明显一致性,核苷酸同源性比较及系统发生树显示:自我国上述四省分离的伊氏锥虫来源于同一株系。布氏锥虫和广西分离的伊氏锥虫株核苷酸碱基与其他分离的锥虫株仅有较小差异。与国外的6株锥虫的同源性为99%～100%,与另外7株的同源性为62%。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 一 前言
• 二 文献综述
• （一）、国内外锥体科寄生原虫的分子分类学研究进展
• 1 我国主要锥虫虫种
• 1.1 伊氏锥虫
• 1.2 马媾疫锥虫
• 2 目前国内外针对于锥虫分类学的研究方法
• 3 锥虫的起源
• 4 锥虫的系统发育方式
• 5 锥虫的进化
• 6 国内以18S rDNA作为锥虫分类关系标准的研究进展
• 7 存在的问题及展望
• （二）、伊氏锥虫的诊断研究进展
• 1 病原学诊断
• 2 血清学诊断
• （三）、锥体科寄生原虫赖以生存的机制及其应用前景
• 1 免疫逃避机制
• 2 耐药性机制
• 3 抑制宿主细胞凋亡机制
• 4 锥体科寄生原虫生存机制的应用前景
• （四）、锥虫的疫苗研究进展
• 三 实验部分
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 虫体、菌种和质粒
• 1.1.2 酶和试剂
• 1.1.3 仪器与设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 虫体的分离
• 1.2.2 虫体总DNA的提取
• 1.2.2.1 虫体细胞的裂解
• 1.2.2.2 RNase的处理
• 1.2.2.3 蛋白质沉淀
• 1.2.2.4 DNA沉淀
• 1.1.2.5 DNA的水合作用
• 1.2.3 浓度与纯度的测定
• 1.3 目的片段的扩增与回收
• 1.3.1 引物的设计与合成
• 1.3.2 PCR扩增
• 1.3.2.1 PCR扩增体系
• 1.3.2.2 PCR扩增程序
• 1.3.3 PCR产物的回收
• 1.4 目的基因的克隆
• 1.4.1 目的片段与pGEM-T Easy载体的连接
• 1.4.2 感受态细胞的制备
• 1.4.3 连接产物的转化
• 1.5 重组质粒的提取与鉴定
• 1.5.1 重组质粒的提取
• 1.5.2 重组质粒的鉴定
• 1.5.3 重组质粒的测序确证
• 2 结果
• 2.1 锥虫18s rRNA的扩增及鉴定结果
• 2.1.1 锥虫18s rRNA PCR扩增结果
• 2.1.2 重组质粒的PCR鉴定结果
• 2.2 目标基因片段核苷酸序列对接及进化关系分析
• 2.3 论文涉及的锥虫18S rRNA基因在GanBank中的序号
• 3 结论与讨论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介
• 导师简介