论文摘要
蛋白酶激活受体（ proteinase activated receptors或protease activated receptors,PARs）,Th2类细胞因子白细胞介素（interleukin, IL）-4,IL-6和IL-13参与过敏反应的发生,肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α可刺激肥大细胞释放组胺和类胰蛋白酶等介质而在过敏炎症中发挥重要作用。然而TNF-α对肥大细胞PAR表达的影响,肥大细胞被TNF-α刺激后分泌Th2类细胞因子的情况及其信号转导通路还不甚清楚。因此本研究探讨促炎症细胞因子TNF-α对肥大细胞PARs表达以及IL-4,IL-6和IL-13分泌的影响,并探讨可能的信号转导通路。肥大细胞激发后,收集各时间点的细胞和上清。细胞处理后采用流式细胞术和实时定量PCR的方法在蛋白水平和mRNA水平检测PAR-1,PAR-2,PAR-3和PAR-4表达情况,用细胞激发信号ELISA（cellular activation of signaling ELISA,CASE）方法检测信号转导通路蛋白Akt,ERK,p38和STAT3磷酸化情况;上清用ELISA方法检测IL-4,IL-6和IL-13水平。结果显示:TNF-α上调PAR-1,PAR-2, PAR-3和PAR-4 mRNA在肥大细胞P815的表达;TNF-α以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4、IL-6和IL-13;应用LY294002可以阻断TNF-α引起的肥大细胞IL-4、IL-6和IL-13分泌,而PD98059, U0126可以阻断TNF-α引起的IL-4和IL-6分泌;同时,应用PD98059, U0126和LY294002可以抑制TNF-α引起的ERK和Akt磷酸化。总之,TNF-α可能影响肥大细胞PARs表达并通过激活Akt和ERK信号转导通路刺激肥大细胞分泌Th2类细胞因子。这些发现提示在过敏性炎症反应中,肥大细胞分泌的TNF-α,可能通过提高肥大细胞对蛋白酶的反应性和促进Th2类细胞因子的分泌,发挥其促进炎症反应的功能,并引起更多的肥大细胞激活脱颗粒。对于TNF-α这些生物效应的发现更进一步完善了关于肥大细胞脱颗粒自我放大机制的假说。
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