猪水泡病病毒RNA的检测及VP1基因在原核中的表达

论文摘要

猪水泡病是由猪水泡病病毒（SVDV）引起的猪的一种烈性传染病,与口蹄疫和水泡性口炎等被国际动物卫生组织列为A类传染病。该病自爆发以来,受到世界各国的高度重视,国内外对本病的诊断和检测方法及其分子生物学特性进行了大量的研究。为满足出入境检疫的需要,在查阅大量文献的基础上,对病毒RNA的检测和VP1基因的原核表达做了进一步的研究。 试验一 RT-PCR检测猪水泡病病毒的建立及应用 根据GenBank已发表的序列,设计了两对引物,用RT-PCR及RT-nPCR方法检测SVDV的RNA,并进行了特异性和敏感性测定。结果表明,该方法具有良好的特异性及灵敏性,能区分口蹄疫、水泡性口炎和猪水泡性疹等水泡性病毒;一次扩增可检出100TCID50的病毒量,二次扩增可检出0.1TCID50的病毒量。用本方法对模拟组织样品和对照样品进行了检测,检出率高于90%。研究表明,RT-PCR及RT-nPCR检测技术均可用于猪水泡病的诊断及流行病学调查。 试验二 猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析 提取SVDV毒株的RNA,RT-PCR扩增了包括VP1基因在内的约872bp的DNA片段。经纯化后,与pMD18-T载体连接,转化Escherichia coli,筛选获得阳性克隆菌株,采用双脱氧DNA末端终止法测得了VP1基因的核苷酸序列,并与国内外已发表的VP1基因序列及其推导的氨基酸序列进行了比较分析。分析表明,该病毒株VP1基因的核苷酸序列与发表SVDV VP1基因的同源性在89%～98%之间,对应氨基酸的同源性在89%～98%之间,氨基酸序列中发生重要变异的氨基酸残基为7、131、136残基,分别是Met、Val和Thr。 试验三 猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的克隆及原核表达 根据测序序列设计了一对针对表达VP1蛋白的引物,并分别引入Xho Ⅰ及

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 20种氨基酸的密码子表
• 20种氨基酸的英文名称及缩写
• 引言
• 1 病毒概述
• 2 本病的流行特点
• 3 SVDV的基因组结构和功能的研究概况
• 4 SVDV编码的蛋白质及其功能
• 5 SVDV的抗原结构
• 6 SVDV和CB5的关系及起源
• 7 SVDV鉴别诊断的研究概况
• 7.1 生物学诊断
• 7.2 反向间接血凝试验（RIHA）
• 7.3 免疫荧光抗体试验
• 7.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）
• 7.5 PCR诊断
• 7.6 实时荧光定量PCR
• 8 SVDV与相关小RNA病毒的同源性比较
• 8.1 致病性和非致病性SVDV株
• 8.2 SVDV和相关小RNA病毒的同源性
• 9 症状与病变
• 10 防制
• 10.1 被动免疫
• 10.2 弱毒疫苗
• 10.3 灭活苗
• 10.4 环境和猪舍消毒
• 试验一 反转录PCR检测猪水泡病病毒RNA
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 试验二 猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 试验三 猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的克隆及原核表达
• 1 材料
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 结论
• 附录
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表文章情况