论文摘要
目的：观察血管紧张素Ⅱ受体1（AT1）拮抗剂氯沙坦和中药川芎嗪联合治疗前后糖尿病大鼠肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）表达的变化，分析其与纤维化相关指标Ⅳ型胶原（COL-Ⅳ）等的相关关系，来探讨氯沙坦与川芎嗪联合干预对糖尿病大鼠的肾脏保护作用及CTGF在糖尿病肾病发生发展中的作用及意义。目前，尚未见相同的研究报道。研究方法：（1）实验分组：40只雄性Wistar大鼠，行右侧肾脏切除术。随机分为肾切除对照组（NC组）、糖尿病组（DM组）、氯沙坦治疗组（DM1组）、川芎嗪与氯沙坦联合治疗组（DM2组）、每组各10只。DM组、DM1组及DM2组禁食10h后，按50mg／kg一次性腹腔注射STZ溶液，NC组注射等量枸橼酸缓冲液，72h后尾静脉采血，测FBG≥16.7mmol／L者确认造模成功纳入实验。实验期间所有大鼠自由饮水进食，糖尿病各组不使用胰岛素及其他降糖药物。其中DM1组、DM2组在模型建立72h后分别给予氯沙坦(20mg．kg-1．d-1)、氯沙坦(20mg．kg-1．d-1)和川芎嗪(200mg．kg-1．d-1)灌胃，DM组仅给予等量生理盐水(10 ml．kg-1．d1-)灌胃，所有大鼠每周检测一次血糖。（2）第8周末留取大鼠24h尿液并检测其尿肌酐、尿白蛋白排泄率（UAER）、β2-MG，进行组间差异比较并分析各指标之间的相关性；8周后一次性处死大鼠，腹主动脉留取动脉血约4ml，测FBG、血肌酐等。（3）取部分肾组织，剥离被膜，称重，10％福尔马林固定、石蜡包埋、切片，HE染色镜下观察糖尿病肾脏常规病理变化。SABC免疫组化方法检测各组肾小球、肾小管CTGF、COL-Ⅳ蛋白的表达情况。每张切片随机取2～3个高倍镜视野（×400），采用Leica Qwin V3图像分析软件，分别分析肾小管、肾小球区域阳性着色的灰度，比较四组之间灰度值。其余部分置于液氮保存，以行RT-PCR检测肾组织中CTGF、COL-Ⅳ的mRNA水平。收集并整理实验数据，应用方差分析t检验等进行统计分析，p＜0.05为有显著性差异。结果：1．试验前各组大鼠体重、血糖基础值无显著性差异（p＞0.05），条件齐同。2．8周后，DM组、DM1组、DM2组大鼠的血糖、HbAlc、Ccr、UAE、β2-MG及肾组织中CTGF、COL-Ⅳ水平均显著高于NC组（p均＜0.05）。3．免疫组化及RT-PCR结果均显示DM组大鼠肾组织中CTGF、COL-Ⅳ水平明显高于DM1组、DM2组（p＜0.01）。4．DM1组、DM2组。肾组织中CTGF、COL-Ⅳ水平及Ccr、UAE、β2-MG均明显低于DM组（p＜0.01），联合组优于单给药组（p＜0.05）。5．相关分析：将各组大鼠肾脏CTGF表达水平与相应的纤维化指标进行相关分析，结果显示CTGF表达水平与COL-Ⅳ、大鼠尿微量白蛋白及肾脏肥大指数等的表达均存在正相关关系，相关系数分别为r=0.327、r=0.837、r=0.826，p均＜0.05。结论：（1）DM大鼠肾组织中CTGF、COL-Ⅳ表达显著升高，24小时尿蛋白排泄量增多；氯沙坦及川芎嗪干预可明显下调肾组织中CTGF、COL-Ⅳ的表达，并能明显改善24小时尿蛋白排泄量。（2）DM大鼠肾组织中COL-Ⅳ表达升高，并与CTGF密切相关，可能是DM肾病发生和发展的病理基础；氯沙坦及川芎嗪可下调肾组织CTGF和ECM的表达，提示可能有助于延缓肾小球硬化进程。（3）氯沙坦可下调糖尿病大鼠CTGF、COL-Ⅳ表达水平，川芎嗪与氯沙坦联合干预对其表达的下调作用更明显，提示两种药物可能从不同的环节共同作用于细胞因子网络从而起到协同作用，对糖尿病肾病的治疗策略有重要的参考价值。在临床上有潜在的治疗前景，但确切机制尚需进一步探讨。
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标签：糖尿病肾病论文; 氯沙坦论文; 川芍嗪论文; 结缔组织生长因子论文; 型胶原论文;