Treg细胞及Foxp3基因多态性与白癜风的相关性研究

论文摘要

背景白癜风是一种黑素细胞选择性毁损导致的的色素脱失性疾病,患者表皮皮损处黑素细胞明显减少或完全消失。白癜风发病率约0.5～2%,好发年龄0～20岁,无明显性别和种族差异。白癜风的发病机制目前尚不清楚,既往学者从不同角度提出了多种学说,如自身免疫学说、神经化学因子学说、黑素细胞自身破坏学说、遗传学说等。但任何单一学说均不能完全解释白癜风的发病机理。临床上白癜风存在明显的家族聚集性和遗传倾向,但其遗传模式并不遵守孟德尔遗传规律,可以认为白癜风是一种多因素、多基因累积致病,染色体上多基因累积遗传效应加上环境因素共同影响疾病的发生和发展。近年来的大量研究支持了白癜风是一种自身免疫相关性疾病,白癜风患者存在明显的细胞和体液免疫的异常,既往研究显示细胞免疫参与了白癜风的发病,但不同研究之间结果有所争论,具体表现在CD4+T细胞水平以及CD4+/CD8+比例升高还是降低上。CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells, Treg）的鉴定丰富了人们对免疫调节和外周免疫耐受的认识。CD4+CD25+Treg细胞能够阻遏自身免疫性CD4+CD25-T细胞的增殖活性,抑制CD4+及CD8+T细胞的免疫应答,进而维持机体免疫平衡。免疫性疾病患者外周血Treg（高表达FOXP3）的抑制能力不足而同时CD4+效应性T细胞（多数表达CXCR3）的增殖活性则过强、体外的增殖试验表明Treg对效应性T细胞的抑制能力也减弱。这些间接提示了白癜风的发病可能与Treg的数量或功能改变有关。然而,白癜风常伴发多种具有遗传倾向的自身免疫性疾病,如自身免疫性甲状腺炎、1型糖尿病、恶性贫血、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和斑秃等,而白癜风本身亦具有遗传倾向和遗传易感性。已有研究证实了在多个白癜风相关的遗传性疾病中,NALP1、PTPN22等基因为它们的共同易感基因。因此,造成自身免疫发生的遗传易感性因子可能会影响白癜风的发病。FOXP3（forkhead/winged helix transcription factor）,又称叉状头/翅膀状螺旋转录因子,特异性表达于Treg细胞,并对其发育和功能起到重要的作用,被认为是CD4+CD25+调节性T细胞发挥功能的主开关。FOXP3主要表达于CD4+T淋巴细胞,与Tr细胞的发育和功能密切相关。FOXP3/Scurfin gene在外周T细胞中表达的精密控制对于维持免疫系统的内环境稳定具有重要意义。Foxp3/FOXP3基因缺陷,会影响Treg的发育和功能,导致IPEX综合症的发生。已有多种实验证明FOXP3基因多态性与1型糖尿病等自身免疫性疾病的发生发展有关。迄今为止,CD4+CD25+调节性T细胞在白癜风中有、无数量或功能的改变, Treg细胞的发育和功能相关基因FOXP3的多态性是否与白癜风的易感性有关,尚无文献报道。目的观察CD4+CD25+T细胞CD4+CD25+FOXP3+nTreg细胞在寻常型进展期白癜风患者中的水平变化情况;分析FOXP3基因外显子-3279,-6054,-924位点多态性与和白癜风的遗传易感性的关系,为阐明白癜风的免疫及遗传机制提供试验依据,并为白癜风的诊断和预后提供新的指标。方法1.选取2007年8月-2007年11月在本院皮肤科门诊就诊的45例寻常型进展期未经免疫治疗的白癜风患者,以Ficoll密度梯度离心法提取外周血单个核淋巴细胞,流式细胞学技术检测CD4+CD25+Treg细胞的水平变化。采用24例健康体检者作为正常对照组。2.应用病例-对照研究方法,在中国汉族人群中选取无血缘关系的白癜风患者和正常人群作为研究对象的基因组DNA,应用PCR-SSP （序列特异性引物聚合酶链反应）技术比较FOXP3基因外显子-3279位点、-924位点、-6054位点多态性在临床确诊的600例白癜风患者和600例正常人中分布频率的差异,分析患者FOXP3基因多态性与白癜风罹患的关系。结果1.细胞学检测寻常型进展期白癜风患者外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25+FOXP3+nTreg细胞数量在患者和正常对照之间有明显统计学差异（P<0.05）,患者组明显高于正常对照组。将CD4+CD25+Treg细胞占CD4+细胞比例在白癜风患者和正常对照之间进行比较,白癜风患者中CD4+CD25+Treg细胞的比例明显升高,且具有统计学差异（P<0.01）。选取CD4+CD25highT细胞,在此基础上对比患者和正常对照之间CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞占CD4+CD25high细胞比例变化,结果患者组CD4+CD25+FOXP3+Treg明显低于正常对照组,（P<0.01）。2.FOXP3基因多态性检测2.1.单因素分析结果发现中国汉族人白癜风患者及正常人群FOXP3基因3个多态性位点的基因型频率分布情况,其中FOXP3位点-6054 AA基因型,-3279 AA基因型,-924 GG基因型在白癜风患者中频率较高且携带者罹患白癜风的风险增加。-6054位点A等位基因频率在两组人群中有统计学差异,与白癜风的发生发展相关。2.2. FOXP3基因-6054位点,不论年龄性别,及临床分型是皮节型或寻常型,携带AA基因型都可能增加罹患白癜风的风险。2.3. -3279位点,携带AA基因型男性增加罹患白癜风的风险。在发病年龄不论大于或是小于等于20岁组中,携带AA基因型都可能增加罹患白癜风的风险。不论临床分型是皮节型还是寻常型,携带AA基因型都可能增加罹患白癜风的风险2.4. -924位点,携带GG基因型男性增加罹患白癜风的风险。在发病年龄不论大于或是小于等于20岁组中,GG基因型都可能增加罹患白癜风的风险。在临床分型中,携带GG基因型的患者增加了罹患寻常型白癜风的倾向。结论本研究首次发现CD4+CD25+Treg细胞在寻常型进展期白癜风患者外周血中的水平发生变化,患者可能处于免疫失衡状态,细胞免疫尤其是Treg细胞可能参与了白癜风的发病。在中国汉族人群中FOXP3基因-3279,-6054,-924位点多态性可能与白癜风的发病相关。本研究的两部分研究结果支持了白癜风的发病与免疫学说、遗传学说相关,并为将来白癜风的个体化预防和治疗提供新思路。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 4+CD25⁺调节性 T 细胞的检测'>实验一 寻常型进展期白癜风患者外周血 CD⁴+CD25⁺调节性 T 细胞的检测
• 1. 材料
• 2. 实验方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 实验二 汉族人白癜风患者 Foxp3 基因多态性分析
• 1 材料
• 2 方法
• 3. 实验结果
• 4. 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢