HDACI染色质重塑作用在白血病发病与治疗中的研究

论文题目: HDACI染色质重塑作用在白血病发病与治疗中的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 内科学

作者: 李薇

导师: 王冠军

关键词: 染色质重塑,组蛋白去乙酰化酶抑制剂,丁酸钠,共刺激分子,凋亡,凋亡敏感蛋白

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 遗传信息不仅由DNA 序列的基因密码决定,组蛋白的共价修饰所引起的染色质重塑同样也调控基因的转录,影响基因的表达,被称为“第二遗传密码”。组蛋白的异常去乙酰化修饰与多种肿瘤的发生发展密切相关,HDACI能通过抑制HDAC、重塑染色质、阻断由于HDAC 募集功能紊乱而导致的基因表达受抑,从而治疗癌症。HDACI 治疗肿瘤的研究已经取得一定的进展,但其抗癌谱和药理机制还有待于进一步研究,尤其在抗白血病方面的研究报道较少。　本研究首次发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂SB 上调NB4、U937、HL-60、Kasumi-1、Jurkat　5 种白血病细胞共刺激分子CD86、CD80 及胞间黏附分子CD54,并证实HDACI 通过促进组蛋白乙酰化作用促进NF-кB和CREB 的表达,后者导致白血病细胞共刺激分子和黏附分子表达增强。上调的共刺激分子能刺激淋巴细胞的增殖,本研究结果为HDACI应用于抗肿瘤治疗又添有力证据,并反证了肿瘤细胞免疫分子表达下调、免疫逃避与异常的去乙酰化有关。　本研究证实SB 能诱导NB4 细胞凋亡,进一步做了联合药物实验研究,单独应用SB 即可诱导凋亡,SB+ATRA 联合应用呈协同作用,效果最强,SB+　As2O3 作用最差,呈拮抗作用,为临床合理联合用药提供了实验基础。　本文还首次使用蛋白质组学的方法,筛选出SB 诱导NB4 细胞凋亡过程中的22 种敏感蛋白,这些敏感蛋白中,有13 种已经被证实为凋亡相关蛋白,9 种蛋白还没有与凋亡相关性的报道,这些蛋白的鉴定为进一步研究HDACI诱导肿瘤细胞凋亡的机制及抗肿瘤药物靶点的筛选奠定了基础。

论文目录:

英文缩略词

绪论

1 组蛋白乙酰化酶(HAT)

1.1 HAT的种类

1.2 HAT 的结构特征

1.3 HAT 的乙酰化靶点

1.4 组蛋白乙酰化酶的生物学功能

1.5 HATs 在肿瘤发生中的作用

2　组蛋白去乙酰化酶(HDACs)

2.1　组蛋白去乙酰化酶的分类

2.2 HDACs 的生理功能

2.3 HDACs 的作用位点

2.4 HDACs 在肿瘤发生中的作用

3 HDAC 抑制剂(HDACI)

3.1 HDACI 的分类

3.2 HDACI 的抗肿瘤效应及作用机制

第一部分 HDACI上调急性白血病细胞共刺激分子和粘附分子表达及分子机制研究

一 材料和方法

1 材料

1.1 细胞株

1.2 试剂

1.3 实验仪器

2 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 筛选SB适宜工作浓度

2.3 CD86、CD80和CD54表达变化测定

2.4 RT-PCR检测共刺激分子CD86的mRNA表达

2.5 AUT凝胶电泳检测乙酰化的组蛋白

2.6 NF-kB试剂盒检测转录因子NF-kB

2.7 pCREB试剂盒检测磷酸化CREB

2.8 同种混合淋巴细胞反应

2.9 统计学分析

二 结果

1 SB适宜药物浓度筛选

2 流式细胞术检测SB对CD86、CD80和CD54分子表达影响

3 荧光显微镜观察SB(0.5mM、48h)处理前后NB4细胞表面CD86、CD80、CD54分子表达变化

4 SB处理的NB4、U937及HL-60细胞CD86mRNA表达检测

5 SB处理的NB4、U937及HL-60细胞组蛋白乙酰化变化检测

6 SB、ATRA和AS203单独或联用48h对NB4、HL-60细胞CD86分子表达影响

7 SB作用前后细胞核内NF-kB含量改变

8 SB作用前后细胞核内磷酸化CREB含量改变

9 SB处理的NB4细胞对异体淋巴细胞刺激作用

三 讨论

第二部分 组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合ATRA及As203诱导NB4细胞凋亡及其机制研究

一 材料和方法

1 材料

1.1 细胞株

1.2 主要试剂及配制

1.3 实验仪器

2 实验分组

3 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 流式细胞仪(FACE)进行细胞周期分析

4 统计学分析

二 结果

1、 不同药物组对 NB4 细胞周期及凋亡的影响

三 讨论

第三部分 SB诱导NB4细胞凋亡的蛋白质组学分析

一 材料与方法

1 材料

1.1 细胞系

1.2 主要试剂

1.3 实验仪器

2 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 双向电泳蛋白质样品的制备

2.3 双向凝胶电泳

2.4 凝胶图像采集与分析

2.5 蛋白点肽质量指纹谱鉴定

2.6 电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)鉴定蛋白质

二 结果

1 标本2-DE图谱的匹配率

2 SB 诱导 NB4 细胞凋亡过程中蛋白差异表达图谱的建立

3 差异表达蛋白点的质谱鉴定

三 讨论

结论

参考文献

攻读博士期间已发表文章

摘要

Abstract

致谢

发布时间: 2005-08-26

参考文献

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