论文摘要
Fas基因是调控细胞凋亡最重要的基因，Fas／Fas配体（Fas Ligand，FasL）通路异常不但与肿瘤发生发展相关，而且可能与肿瘤细胞对部分化疗药物的敏感性有关。部分卵巢癌细胞中Fas基因表达水平低下或缺失，一方面使肿瘤细胞对Fas基因介导凋亡的敏感性下降，另一方面也可能导致卵巢癌细胞对化疗药物产生抵抗。提高肿瘤细胞中Fas基因表达水平可能是卵巢癌基因治疗的一种有效方法，但外源基因不能在靶部位获得高效表达是目前肿瘤基因治疗面临的突出问题，本研究着重探讨如何实现Fas基因在肿瘤部位获得高效特异性表达及Fas基因表达后引起的生物学效应。 在研究的第一部分，我们采用免疫荧光流式细胞术检测多种卵巢癌细胞系中Fas基因的表达，并测定携带增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescentprotein，EGFP）报告基因的腺病毒载体Ad5-EGFP和嵌合型腺病毒载体Ad5F35一EGFP对不同卵巢癌细胞系的转染率。结果表明，卵巢癌细胞中Fas基因表达具有异质性，其中泰素敏感型和耐药型SKOV3细胞系Fas表达水平最低：Ad5和Ad5F35对不同卵巢癌细胞系的转染效率差异较大，但就对同一种卵巢癌细胞系的转染能力而言，Ad5略优于Ad5F35。 第二部分我们应用基因重组技术克隆构建了3个含肿瘤特异性启动子hTERT及二步转录放大系统（two-step transcriptional amplification，TSTA）调控元件的穿梭质粒，分别命名为pDC316-hTERT-Fas、pDC316-hTERT-GAL4VP2、pDC316-G5E4T-Fas，采用AdMaxTM系统将其包装成重组腺病毒载体Ad5-hTERT-Fas、Ad5-hTERT-GAL4VP2和Ad5-G5E4T-Fas，并进行纯化扩增。 在第三部分研究中，我们采用制备好的重组腺病毒分别转染泰素敏感型／耐药型SKOV3细胞系及人胚肺成纤维细胞（HELF），并测定Fas基因表达水平；然后分别联合应用抗Fas IgM抗体或γ δT淋巴细胞，观察癌细胞的生长抑制作用及化疗敏感性有无改变。结果证实，携带hTERT和TSTA调控元件的Ad5转染靶
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标签：基因治疗论文; 卵巢癌论文; 基因论文; 组织特异性启动子论文; 二步转录放大论文;