论文摘要
一、测定血浆及尿样中W198浓度的分析方法研究目的建立灵敏、准确、简便的反相高效液相色谱质谱联用（HPLC-MS／MS）方法，测定人血浆及尿样中溴泰君（W198）浓度。方法选择合适的测定人血浆及尿样中W198预处理和色谱质谱条件，并进行分析方法学验证。建立了以ALP为内标，测定W198血药及尿药浓度的HPLC-MS／MS方法。采用Diamonsil C18色谱柱（150×4.6mm，5μm），柱温30℃，流动相为含0.02％三乙胺的甲醇（甲酸调pH至7.4），流速为0.7ml／min。样品经碱化和2％异戊醇的正己烷萃取浓集后进样，MRM模式下分析，以药物和内标的峰面积比定量。结果W198及内标保留时间分别为4.0、4.3min，血浆及尿样标准曲线在0.25～256μg／L范围内线性良好，最低定量浓度均为0.25μg／L。血浆样品方法回收率100.11％～112.8％，尿样方法回收率101.08％～109.60％，血浆样品及尿样日内和日间RSD均<6％。结论该方法灵敏、准确、简便，用于700多例次受试者血样及尿样的检测取得了令人满意的结果。二、W198单次静脉给药人体药代动力学研究目的研究W198人体内单次静脉滴注后的药代动力学。方法采用随机分组对照实验，将30位受试者随机分成3组，分别按10mg／m2、20mg／m2、30mg／m2剂量单次静脉滴注W198注射液，相应时间点采血，其中中剂量组，受试者于相应时间段收集尿标本一次。采用HPLC-MS／MS方法测定血样及尿样中W198浓度，绘制药-时曲线，用DAS 2.0药代动力学程序进行室模型拟合，求出药代动力学参数，对各剂量组的主要药代动力学参数进行成组资料方差分析，完成10mg／m2、20mg／m2、30mg/m2剂量单次静脉滴注W198注射液的药代动力学研究。结果于恒速滴注后0.5～2h达峰，低、中、高三剂量组平均Cmax分别为24.793±8.749μg/L、39.59±9.92μg/L、64.313±13.93μg/L，平均AUC0～t分别为365.832±78.119μg/L·h、688.152±159.91μg/L·h、1096.284±271.849μg/L·h，T1/2β为52.199±10.263～62.882±6.977h，W198以原药从尿中累计排泄率仅为0.612±0.191％，低、中、高三剂量组除Cmax、AUC0～t和AUC0～∞有差异外其他参数均无统计学差异。结论单次静滴W198药代动力学符合开放二室模型，并提示在10～30mg／m2剂量范围内W198可能具备线性动力学特点，药代动力学无性别差异。三、W198代谢物定性研究目的利用HPLC-MS／MS对大鼠静脉注射W198后可能的代谢物进行研究。方法取大鼠胆汁或尿样品经预处理后，用HPLC法分离可能的代谢物，再用API 3000 LC／MS／MS四极杆串联质谱仪进行Q1扫描，选择可能代谢物的离子进行MS2扫描，对Q1及MS2质谱图进行图谱解析，确定代谢物的可能结构，在条件允许时与合成的对照品比较，以确证其结构。结果明确了W198的代谢物之一去甲基W198（DW198）的结构，对于可能是W198氧化代谢物的m／z 715／717，730／732两离子对峰未能进行最终结构确证。结论W198静注后体内有多个代谢物，其中DW198为其代谢物之一。四、测定W198代谢物血药浓度的分析方法研究及药代动力学研究目的建立灵敏、准确、简便的主要测定W198代谢物之一DW198血药及尿样浓度的HPLC-MS／MS方法。方法采用Diamonsil C18柱（150×4.6mm，5μm）色谱柱，柱温为40℃，流动相为50mmol／L醋酸铵：甲醇=5：95（甲酸调pH至6.6），流速为0.6ml／min，样品经碱化和乙酸乙酯萃取浓集后进样，质谱检测，ALP作内标，以药物和内标的蜂面积比定量。测定20mg／m2组血样及尿样中DW198浓度，绘制药-时曲线。对血浆中其余W198可能代谢物，计算其与内标的峰面积比，再由DW198峰面积与内标峰面积比对浓度的响应因子求出浓度，绘制均值药-时曲线。用DAS2.0药代动力学程序进行室模型的拟合，求出DW198药代动力学参数，揭示人单次静脉注射W198注射液后DW198药代动力学参数的基本特点和变化规律。结果DW198及内标保留时间分别为4.0、4.3min，血浆及尿样标准曲线在0.25～256μg/L范围内线性良好，DW198最低定量浓度均为0.063μg／L。血浆样品方法回收率98.66％～101.59％，尿样方法回收率96.10％～103.30％，血浆样品日内RSD<7％，日间RSD<14％。尿样日内RSD<6％，日间RSD<7％。按二室模型计算的主要药代动力学参数为：于恒速滴注后50～98h达峰，平均实测Cmax为1.11±0.46μg/L、统计矩计算AUC0～t、MRT0～t、VRT0～t、分别为166.07±57.50μg/L·h，100.96±5.22h和2717.18±272.80h。房室模型参数T1/2α、T1/2β、V／F和CL／F分别为58.96±16.99h、69.32±0.00h、13159.18±6520.88L／m2和64.53±38.88L／h／m2。给药后96h DW198从尿中累计排出量仅为29.52±14.08μg。结论单次静滴20mg／m2W198后其代谢物DW198的药代动力学符合二室开放模型。