肿瘤抑制基因PTEN调控Pleiotrophin的表达及与乳腺癌关系的研究

论文题目: 肿瘤抑制基因PTEN调控Pleiotrophin的表达及与乳腺癌关系的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 肿瘤临床药理学

作者: 张宏艳

导师: 宋三泰,李刚,江泽飞

关键词: 乳腺癌,肿瘤抑制基因,原癌基因,启动子,免疫组织化学,双荧光素酶分析

文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院

发表年度: 2005

论文摘要: 原癌基因Pleiotrophin（Ptn）、抑癌基因Pten是与乳腺癌发生、发展相关的两个基因。Pten基因是第一个具有磷酸酶功能的肿瘤抑制基因,其在肿瘤中的突变频率与著名的p53基因相当,Pten编码的蛋白具有调控细胞周期,促进细胞凋亡,抑制肿瘤转移等多种生物学功能,分别是通过对P13K/Akt,MAPK,FAK等信号转导通路的协同调节来实现。Ptn是一个氨基酸序列极为保守的原癌基因,在胚胎期组织中表达,很少表达于成年正常组织中,但可以在包括乳腺癌在内的多种肿瘤细胞系和肿瘤组织中存在;具有促进血管生成、细胞转化、抗凋亡、促有丝分裂等与肿瘤侵袭性生长有关的特性。本课题组既往的研究发现,Ptn在两种不同的PTEN缺失的胚胎成纤维细胞系中高表达,并且其功能同PTEN基因敲除小鼠的表型有相符之处,Ptn在乳腺特异缺失PTEN的小鼠模型的乳腺癌组织中高表达。为了阐明Pten基因与乳腺癌的关系,及其是否具有调控Ptn的能力?是否通过Akt发挥其调控作用的?本研究首先检测了中国人乳腺癌组织中Pten基因的突变和表达情况,结果发现45例乳腺癌新鲜组织中,存在1例位于第2外显子的错义突变;31.3%（14/45）存在Pten启动子CpG岛的甲基化改变,其中64.3%（9/14）PTEN蛋白表达缺失,50%（9/18）PTEN表达缺失的乳腺癌存在Pten启动子甲基化;而10例乳腺癌癌旁正常组织均未检测到Pten基因突变和启动子区的甲基化;在146例乳腺癌石蜡包埋组织中,发现PTEN表达与原发肿瘤大小、肿瘤临床分期、PTEN表达与ER、PR表达相关,PTEN表达与乳腺癌预后有一定关系,其表达为（+++）者无病生存率明显高于阴性及+～++者,并且,ER、PTEN同时表达的预后明显优于仅一项表达或均未表达者,但多因素分析PTEN表达最终未进入方程。随后,我们对Ptn启动子进行了生物信息学分析,通过NCBI网站中Unigene确认了转录起始点,采用PCR扩增的方法对小鼠与人的Ptn基因的启动子分别进行克隆,构建至荧光素酶报告载体（pGL3-Basic）转染至293或3T3细胞,Dual-GloTM荧光素酶检测系统测定发光强度,确定其启动子区在小鼠为-1099/+11（1109bp）,人Ptn启动子区为-998/+73（1070bp）。然后采用PCR的方法获得小鼠Ptn启动子的系列截短突变体,

论文目录:

缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

参考文献

第一部分 Pten基因在中国人乳腺癌中的表达与突变状况的研究

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分细胞因子Ptn启动子的克隆与活性研究

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 PTEN／Akt信号通路调控pleiotrophin的研究

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第四部分乳腺癌组织Pleiotrophin蛋白表达的研究

材料和方法

结果

讨论

参考文献

小结

附录

致谢

发布时间: 2005-09-05

参考文献

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肿瘤抑制基因PTEN调控Pleiotrophin的表达及与乳腺癌关系的研究

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