FDM豚鼠RPE-脉络膜RA信号通路的研究

论文摘要

研究目的建立早期形觉剥夺性近视（form-deprivation myopia, FDM）动物模型,检测豚鼠视网膜色素上皮-脉络膜中转化生长因子β2 （transforming growth factor-beta2, TGF-β2）及活化蛋白-1 （activator protein-1, AP-1）的水平;形觉剥夺同时分别给予AP-1的抑制剂姜黄素和视黄酸受体β（retinoic acid receptorβ, RARβ）特异性抑制剂LE540,比较不同处理对屈光状态的影响,并检测视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2和AP-1的水平,探讨TGF-β2和AP-1在形觉剥夺性近视豚鼠视网膜色素上皮-脉络膜中的作用及其与视磺酸（retinoic acid, RA）信号传递过程的关系。方法第一部分：同批次3周龄豚鼠12只,采用戴头套法遮盖左眼,右眼为自身对照眼。饲养至21天作为形觉剥夺动物模型。观测指标：1.实验前后均测量屈光度,实验结束后摘除眼球,测量眼轴长；2.应用ELISA法检测视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2含量,western blotting方法检测视网膜色素上皮-脉络膜中AP-1含量的变化。第二部分：另选同种豚鼠40只,随机分为4组,Ⅰ组6只,为正常对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组各12只。Ⅱ组为实验对照组,左眼球后注射0.1%DMSO0.1ml;Ⅲ组左眼球后注射0.1m（1.5g/L）姜黄素；Ⅳ组左眼球后注射0.1ml （0.1 g/L） LE540;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均隔日给药一次,共3次,并遮盖左眼至第21天。右眼为自身对照眼。观测指标同第一部分。计量资料数据以x±s表示,采用SPSS16.0统计学软件进行统计学处理,并进行正态分布及Levene方差齐性检验后行t检验和方差分析。结果第一部分：12只动物实验眼诱导出明显的相对近视,且与自身对照眼比较差异有统计学意义（t=-0.575,P=0.001）。实验眼眼轴均长于自身对照眼（t=-4.920,P=0.000）。实验眼视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2水平较自身对照眼明显降低（t=-4.933, P=0.004）, Western blotting所得c-Fos和GAPDH的灰度图显示,实验眼视网膜色素上皮-脉络膜中AP-1活性较自身对照眼减低（t=-2.832,P=0.037）。第二部分：实验干预后Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ组的实验眼形成相对近视,三组左右眼屈光度差异均有显著统计学意义（P<0.05）。Ⅲ组和Ⅳ组之间实验眼实验前后屈光度变化差异有统计学意义（P<0.05）。Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组干预后左右眼眼轴长度差异均有统计学意义（P<0.05）。Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组实验眼视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2含量较自身对照眼明显降低（P<0.05）；Ⅰ组实验后双眼视网膜色素上皮-脉络膜中的TGF-β2含量与自身对照眼相比差异无统计学意义（P>0.05）。Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组实验后实验眼视网膜色素上皮-脉络膜中的AP-1活性表达与自身对照眼相比均明显降低（P<0.05）；Ⅰ组实验后双眼视网膜色素上皮-脉络膜中的AP-1活性表达与自身对照眼相比差异无统计学意义（P>0.05）。结论豚鼠形觉剥夺可导致近视发生；豚鼠早期形觉剥夺眼视网膜色素上皮-脉络膜中AP-1活性和TGF-β2表达下调；AP-1抑制剂姜黄素的使用可以影响豚鼠形觉剥夺性近视的形成作用,豚鼠早期形觉剥夺眼视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2表达受AP-1活性的影响；RARβ抑制剂LE540的使用可以影响豚鼠早期形觉剥夺性近视的形成作用；豚鼠早期形觉剥夺眼视网膜色素上皮-脉络膜中RARβ可以调控AP-1和TGF-β2的活性表达,AP-1和TGF-β2可能是调控豚鼠FDM形成的RA信号通路的重要因子,RA--RARp--AP-1--TGF-β2的视磺酸信号通路可能是调控豚鼠FDM形成的重要通路之一。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 技术路线
• 一、TGF-β2和AP-1在早期形觉剥夺性近视豚鼠眼视网膜色素上皮-脉络膜中的变化
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 主要实验试剂耗材及仪器
• 1.1.2 实验动物及模型制备
• 1.1.3 实验方法
• 1.1.4 统计学分析
• 1.2 结果
• 1.2.1 屈光度变化
• 1.2.2 眼轴变化
• 2含量的变化'>1.2.3 TGF-β₂含量的变化
• 1.2.4 AP-1的Western印迹杂交电泳凝胶成像
• 1.3 讨论
• 1.3.1 形觉剥夺性近视眼动物模型
• 2含量在豚鼠形觉剥夺性近视眼RPE-脉络膜中的变化'>1.3.2 TGF-β₂含量在豚鼠形觉剥夺性近视眼RPE-脉络膜中的变化
• 1.3.3 AP-1在豚鼠形觉剥夺性近视眼RPE-脉络膜中的变化
• 1.4 小结
• 二、姜黄素和LE540在早期形觉剥夺性近视豚鼠视网膜色素上皮-脉络膜中的作用
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 主要实验试剂耗材及仪器
• 2.1.2 实验动物及模型制备
• 2.1.3 实验方法
• 2.1.4 统计学分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 屈光度变化
• 2.2.2 眼轴变化
• 2含量的变化'>2.2.3 TGF-β₂含量的变化
• 2.2.4 AP-1的Western印迹杂交电泳凝胶成像
• 2.3 讨论
• 2.3.1 形觉剥夺和姜黄素对豚鼠屈光状态和眼轴的影响
• 2.3.2 形觉剥夺和LE540对豚鼠屈光状态和眼轴影响
• 2的影响'>2.3.3 抑制AP-1对形觉剥夺性近视动物RPE-脉络膜中TGF-β₂的影响
• 2 #2和AP-1的影响'>2.3.4 抑制RARβ对形觉剥夺性近视动物视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β₂#2和AP-1的影响
• 2.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述 TGF-β及其在近视眼发病作用中的研究
• 综述参考文献
• 致谢