山羊乳腺上皮细胞对外周血多形核嗜中性粒细胞功能的影响

论文摘要

本研究采用胶原酶和胰蛋白酶相结合的消化法进行了山羊乳腺上皮细胞的体外培养,并用MTT法测定其对外周血多形核嗜中性粒细胞(PMN)活性的影响,为进一步揭示乳腺局部免疫机制提供试验依据。试验取得以下结果:1.首先用2 g/L的胶原酶消化4.5 h,再用0.5 g/L的胰蛋白酶消化30 min消化山羊乳腺组织,与单独使用胶原酶消化相比获得了更多的单细胞。所培养的原代细胞经0.5 g/L胰蛋白酶/0.2 g/L EDTA纯化3～4次,得到较为纯净的山羊乳腺上皮细胞,经免疫组织化学鉴定,阳性率大于90%。2.组织块培养时,乳腺组织在涂有鼠尾胶原和不铺鼠尾胶原的培养皿上均能长出乳腺上皮细胞,表明山羊乳腺上皮细胞的生长不依赖鼠尾胶原。3.分别采用淋巴细胞分离液与Percoll分离液相结合的梯度离心法、Dextran作用下的红细胞自然沉降法和裂解红细胞法进行PMN的分离。结果显示,Percoll梯度离心法所得到的PMN数量多,形态改变小,明显优于另外两种方法。4.用MTT法测定山羊乳腺上皮细胞及其条件培养液对外周血PMN活性的影响,结果显示,山羊乳腺上皮细胞及其条件培养液对外周血PMN的活性有明显的抑制作用。这提示乳腺上皮细胞通过直接或间接途径抑制PMN功能的发挥。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 文献综述
• 第一章 乳腺局部免疫研究进展
• 1.1 乳腺的结构
• 1.2 乳腺的非特异性免疫防御
• 1.2.1 乳头的机械屏障
• 1.2.2 MФ
• 1.2.3 PMN
• 1.2.4 NK 细胞
• 1.2.5 肥大细胞
• 1.2.6 可溶性因子
• 1.3 特异性免疫防御
• 1.3.1 细胞免疫
• 1.3.2 体液免疫
• 1.4 细胞因子控制奶牛乳房炎的理论机制
• 1.4.1 细胞因子促进乳腺内细胞MHCII 类分子表达，促进抗原递呈和免疫应答
• 1.4.2 细胞因子增强乳腺中MФ、PMN 的吞噬力和杀菌力
• 1.4.3 细胞因子促进免疫细胞增殖分化，提高细胞毒作用，促进乳腺免疫应答
• 1.4.4 细胞因子对炎症介质进行调控，从而控制乳房的炎症过程
• 第二章 乳腺上皮细胞培养研究进展
• 2.1 乳腺上皮细胞培养方法的研究进展
• 2.2 乳腺上皮细胞的类型及相互关系
• 2.3 激素和细胞外基质对乳腺上皮细胞生长的调控
• 2.3.1 细胞外基质的作用
• 2.3.2 激素等调节因子对乳腺上皮细胞分化及增殖的调控
• 试验研究
• 第三章 山羊乳腺上皮细胞的分离培养
• 3.1 材料
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要仪器设备
• 3.2 方法
• 3.2.1 组织块法培养山羊乳腺上皮细胞
• 3.2.2 消化法培养山羊乳腺上皮细胞
• 3.2.3 原代乳腺上皮细胞的传代培养
• 3.2.4 传代乳腺上皮细胞的传代培养
• 3.2.5 免疫组化染色
• 3.3 结果
• 3.3.1 组织块法培养结果
• 3.3.2 消化法分离培养结果
• 3.3.3 免疫组化染色结果
• 3.4 讨论
• 3.4.1 原代培养方法的选择
• 3.4.2 原代培养与传代培养中酶的选择
• 3.4.3 山羊乳腺上皮细胞的染色判定
• 3.5 小结
• 第四章 山羊乳腺上皮细胞对血液PMN 活性的影响
• 4.1 材料
• 4.1.1 山羊抗凝血
• 4.1.2 主要试剂
• 4.1.3 主要仪器设备
• 4.2 方法
• 4.2.1 PMN 的分离
• 4.2.2 山羊乳腺上皮细胞对血液PMN 活性的影响
• 4.3 结果
• 4.3.1 PMN 的分离结果
• 4.3.2 PMN 的活性检测结果
• 4.4 讨论
• 4.4.1 PMN 的分离方法的比较
• 4.4.2 山羊乳腺上皮细胞对PMN 活性的影响
• 4.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介