全反式维甲酸对大肠癌细胞及其Cx32、Cx43效应的研究

论文摘要

背景与目的：大肠癌居恶性肿瘤发病第3-4位,根据北京及上海的统计资料,其发病率近十年来以2.4%迅速上升,成为严重危害人民身体健康的恶性肿瘤之一。大肠癌的治疗模式是以手术为主的综合治疗,化学药物的联合治疗是大肠癌多学科综合治疗的重要组成部分,资料证明规范联合的化学治疗可明显提高大肠癌患者的生存,但治愈率仍然较低,转移性大肠癌的5年生存率仅为11%。因此,迫切需要探索新的大肠癌治疗的新方向。全反式维甲酸（All-Trans Retinoic Acid, ATRA）是类维生素A家族中维生素A的活性代谢产物,已在治疗急性早幼粒细胞白血病（Acute Promyelocytic Leukemia, APL）中取得了显著效果。体外实验表明,ATRA亦对实体瘤细胞,如食管癌、宫颈癌、胃癌、中枢神经系统肿瘤等发挥生物学效应,它通过作用于与肿瘤细胞生存相关的信号通路,产生诸如细胞增殖抑制,诱导肿瘤干细胞分化,改变细胞表达蛋白等作用,并最终引起肿瘤细胞生物学行为的改变。缝隙连接（Gap Junction, GJ）是细胞间连接（桥粒连接、粘附连接、紧密连接及缝隙连接）形式之一,在细胞增殖、分化、内环境稳定及机体的新陈代谢、生长发育等生理过程中起重要作用,而缝隙连接介导的细胞间通讯（Gap-Junctional Intercellular Communication, GIJC）是其发挥作用的主要方式。间隙连接蛋白（Connexins,Cx）是缝隙连接的基本组成单位及发挥作用的分子基础。连接蛋白与大肠癌关系密切,其中Cx43及Cx32是目前研究较多的两种间隙连接蛋白。如某些因素使Cx43及Cx32在大肠癌细胞胞膜分布减少,胞浆积聚增加,将引起GIJC功能受损,最终大肠癌细胞问通信方式改变,并导致癌细胞浸润及转移。鉴于ATRA在实体瘤中研究现状以及细胞间隙蛋白在大肠癌中的作用,本文选择ATRA作用于大肠癌SW480及CaC02细胞,初步探讨ATRA对大肠癌细胞的增殖、迁移行为的影响,并检测胞膜Cx32、Cx43表达的变化,为进一步研究ATRA对大肠癌生物学行为影响及其机制提供线索。方法：取对数生长期大肠癌细胞分为ATRA处理组及对照组,分别以1×10-8 mol·L-1, 1×10-7 mol·L-1,1×10-6 mol·L-1, 1×10-5 mol·L-1及1×10-4 mol·L-1维甲酸处理Caco2及SW480细胞,应用MTT法测定其生长抑制率；以1×10-5mol·L-1及1x10-4 mol·L-1维甲酸处理SW480细胞,分别应用划痕法测定其迁移率；流式细胞术测定Cx32、Cx43表达情况。结果：维甲酸在1×10-8mol·L-1～1×10-5 mol·L-1浓度时对CaCO2及SW480细胞生长均无明显影响,当其浓度达到1×104mol·L-1时呈现出明显抑制作用,对CaCO2细胞24h、48h及72h抑制率分别为54.90±6.98%、84.19±4.14%及87.58±8.03%,对SW480细胞24h、48h及72h抑制率分别为56.72±6.65%、76.71±3.86%及83.71±10.30%；1×10-5mol·L-1 ATRA可明显抑制SW480的迁移能力,1×10-5 mol·L-1 ATRA处理后SW480细胞24h及48h后平均迁移率分别为8.97±4.36%及21.85±5.75%,与正常细胞（分别为41.90±5.24%及67.25±6.60%）相比明显下降（p＜0.05）；SW480细胞胞膜Cx32阳性率为59.89±0.78%,1×10-5mol·L-1及1×104mol·L-1 ATRA处理48h后阳性率分别增至72.31±4.02%（p<0.05）及78.88.00%（p<0.05）；SW480细胞胞膜Cx43阳性率为40.55±9.70%,1×10-5 mol·L-1及1×10-4mol·L-1 ATRA处理48h后阳性率分别增至64.03±1.59%（p＜0.05）及66.33±2.77%（p<0.05）。结论：1×10-4 mol·L-1 ATRA可明显抑制大肠癌细胞CaCO2及SW480增殖；1×10-5 mol·L-1 ATRA即可使SW480细胞的体外迁徙能力降低,并且使SW480细胞胞膜Cx43及Cx32分布增加,这可能是SW480细胞迁徙能力降低的潜在机制之一。

论文目录

• 附件
• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩写词表
• 第1章 引言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 细胞株人大肠腺癌细胞株CACO2及SW480均购自中国科学院细胞库
• 2.2 主要试剂及耗材
• 2.3 主要仪器
• 2.4 主要试剂配制
• 2.5 实验方法
• 2.6 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 倒置显微镜观察细胞形态
• 3.2 MTT法检测细胞生长抑制率
• 3.3 细胞划痕法检测ATRA对SW480细胞迁移能力的影响
• 3.4 流式细胞术检测ATRA对SW480胞膜Cx32及Cx43表达的影响
• 第4章 讨论
• 4.1 大肠癌现状
• 4.2 ATRA对大肠癌细胞的生物学行为的影响
• 4.3 ATRA对SW480细胞间隙连接蛋白Cx32及Cx43胞膜分布的影响
• 第5章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果
• 致谢