MAPC/EPC性组织工程化静脉瓣

论文摘要

采用生物学及工程学原理构建组织工程化静脉瓣有望能治愈下肢慢性静脉功能不全,具有良好的临床应用前景。本文将受体Beagle犬骨髓来源的成体多能祖细胞(multipotent adult progenitor cells,MAPC)和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)作为种子细胞,采用同种异体脱细胞静脉瓣细胞外基质材料作为支架,利用多点注射、加压灌注的方法将MAPC种植到支架内部,然后应用血管自动旋转脉动系统,使EPC黏附于支架的内表面及瓣膜的窦腔两面,即得到“MAPC/EPC性组织工程化静脉瓣”;并对其形态结构、生物力学特性做了进一步研究。然后采用端端吻合术将构建的组织工程化静脉瓣吻接到受体犬颈外静脉,观察其体内过程。本文包括五部分内容:MAPC的分离、培养及鉴定;EPC的分离、培养及鉴定;同种异体脱细胞静脉瓣支架的制各;MAPC/EPC性组织工程化静脉瓣体外构建;组织工程化静脉瓣的在体研究。

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摘要

Abstract

详细摘要

英文缩写表

绪言

第一部分 MAPC的分离、培养、鉴定及诱导分化

一前言

二材料和方法

（一）试剂和设备

（二） MAPC纯化、扩增、鉴定及诱导分化

1、MAPC的分离、纯化

2、MAPC的培养

3、MAPC的传代培养

4、MAPC生长曲线绘制

5、MAPC的流式细胞技术检测

6、MAPC表面标志的免疫荧光检测

7、MAPC超微结构分析

8、MAPC向平滑肌样细胞的诱导分化

三结果

-细胞原代培养'>（一） CD45^-细胞原代培养

（二）细胞传代培养

（三） MAPC的生长曲线

（四）流式细胞技术检测

（五）细胞的表面标志的免疫荧光检测

（六）细胞的超微结构

（七） MAPC向平滑肌样细胞的诱导分化

四讨论

参考文献

第二部分 EPC的分离、培养、鉴定及诱导分化

一前言

二材料和方法

（一）试剂和仪器设备

（二）方法

1、细胞的分离、纯化

2、分选细胞的培养扩增

3、EPC生长曲线绘制

4、流式细胞技术检测

5、细胞表面标志的免疫荧光检测

6、RT-PCR检测

7、EPC的超微结构检测

8、向内皮细胞的诱导分化

三结果

（一）细胞原代培养

（二）细胞传代培养

（三） EPC生长曲线

（四）流式细胞技术检测

（五）细胞的表面标志的免疫荧光检测

（六） RT-PCR检测

（七） EPC的超微结构

（八）向内皮细胞的诱导分化

四讨论

参考文献

第三部分同种异体脱细胞静脉瓣支架的制备

一前言

二材料和方法

（一）试剂和仪器设备

（二）同种异体脱细胞静脉瓣支架的制备

（三）脱细胞支架形态学检测

（四）免疫组织化学染色

三结果

（一）形态学检测

1、大体观察

2、H-E染色

3、胶原纤维、弹力纤维染色

4、扫描电镜

（二）力学特性

（三）免疫组织化学染色

四讨论

参考文献

第四部分 MAPC/EPC性组织工程化静脉瓣的体外构建

一前言

二材料和方法

（一）试剂和仪器设备

（二）方法

1、组织工程化静脉瓣的构建

2、构建的MAPC/EPC性组织工程化静脉瓣的大体观察

3、H-E染色检测

4、胶原纤维、弹力纤维染色（Masson法）

5、扫描电镜检测

6、透射电镜观察

7、生物力学检测

8、免疫组织化学染色

三结果

（一）组织工程化静脉瓣的形态结构

1、构建静脉瓣的大体观察

2.H-E染色

3.胶原纤维、弹力纤维染色

4.扫描电镜检测

5.透射电镜检测

（二）生物力学检测结果

（三）免疫组织化学染色

四讨论

参考文献

第五部分组织工程化静脉瓣的在体研究

一前言

二材料和方法

（一）试剂和仪器设备

（二）方法

1、实验动物分组

2、手术移植

3、彩色超声检查

4、小动物显微超声成像

5、数字减影血管造影检查

6、标本获取、形态学观察

7、免疫组织化学染色

三结果

（一）整体动物观测

（二）彩色超声多普勒检查

（三）小动物显微超声成像

（四）逆行性数字减影血管造影

（五）形态学观察

1、大体观察

2、H-E染色观察

（六）免疫组织化学染色

四讨论

参考文献

全文小结

本课题的创新点和意义

文献综述

在读期间发表论文、申请基金和专利申请

致谢

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