论文摘要
目前最常使用的增殖标记物是增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclearantigen，PCNA)和Ki67。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，为DNA聚合酶6的辅助蛋白，是DNA复制过程中一种必需的物质，在整个细胞周期中，PCNA的表达局限在细胞核内。其表达水平在G1中期时迅速增加，并在S期保持高水平，G2／M期致G1期时开始下降。但是有研究表明PCNA不仅涉及DNA的复制，而且还涉及DNA的修复，这使得正在进行修复的细胞也有PCNA的表达，干扰了作为细胞增殖标志物反映细胞增殖活性的准确性。Ki67即细胞核相关抗原(nuclear associated antigen ki67)，是存在于增殖细胞核中的一种非组蛋白性核蛋白，由两条多肽链构成，其表达随细胞周期不同时相而异。G0期无表达，G1中期到晚期出现，S期和G2期逐渐增加，M1期达到高峰，M期后迅速降解或丢失抗原决定簇。许多研究也已证实了它与增殖细胞生长部分的关联，但Ki67抗原的很多功能仍未知晓，而且，有研究发现Ki67并非细胞增殖不可缺少的因子，在G1期的早期没有Ki67的表达，它的表达还受到诸如细胞的营养状态等外界因素的影响。MCM蛋白家族是一组必需的复制起始因子，它能确保细胞周期中DNA准确的复制。通过在G1期和染色体准确的结合以及在S期和染色体的分离，MCM蛋白家族限制在每个细胞周期中DNA的复制只发生一次。MCM蛋白与细胞复制叉(replication forks)有关，只有含有MCM蛋白的复制起始点能启动复制叉，当复制从起始点启动之后，连接的MCM蛋白移位以至于复制起点不能再次被启动，MCM蛋白也可以起DNA解螺旋酶的作用，以至展开复制过程中的DNA链。不同的机体及细胞表明只有分化成熟的细胞及静止期(GO期)细胞中不表达MCM蛋白。MCM蛋白家族在细胞周期中对复制的启动功能表明它们可能人类恶性肿瘤增殖和预后的有价值的标记物。本实验通过检测MCM2在正常食管上皮及上皮各级病变中、不同分化级别食管鳞状上皮癌、食管表面脱落细胞中的表达情况，并和传统细胞增殖标志物PCNA及Ki67比较，探究MCM蛋白家族作为增殖性指标在食管癌及癌前病变的早期诊断意义。标本来源：1．食管癌手术切除标本：选自2005年9月到11月份河南省林州肿瘤医院食管鳞状上皮癌手术标本，共43例，其中Ⅰ级12例、Ⅱ级14例、Ⅲ17例。另选取食管癌手术中癌旁2cm外远隔部位及切缘合并有癌前病变(单纯增生、非典型增生、原位癌)的病理标本，合计单纯增生上皮15例，非典型增生15例，原位癌10例。2．正常食管上皮对照标本：15例非食管疾病死亡尸体解剖病例。3．普查高危健康人群食管内镜钳取标本：来自于河南省林州市医院食管癌高危人群(40岁～70岁)普查内镜钳取标本共171例，其中正常食管粘膜上皮54例，单纯性增生48例，非典型增生69例。4．食管脱落细胞标本：收集2006．11汕头大学医学院病理教研室食管癌切除未固定标本10例，制作表面脱落细胞蜡块。研究方法：免疫组织化学EnVision二步法分别染色观察PCNA、Ki67以及MCM2三种核增殖蛋白在食管病变组织中的表达情况。结果：1．MCM2的阳性标记指数在食管癌标本中随着分化级别的降低而增大，各组之间的差别具有统计学意义(P＜0.05)。Ki67的标记指数也随着分化级别的降低而增大，但是各组之间的差别无统计学意义(P＞0.05)，PCNA的标记指数在中分化和低分化食管癌的差异有统计学意义(P＜0.05)，在高分化和中分化食管癌间的差异没有统计学意义(P＞0.05)。2．从正常→单纯性增生→非典型增生→原位癌，Ki67、MCM2和PCNA的标记指数均逐渐增高，且其差别具有统计学意义。其中在原位癌和非典型增生中，MCM2的标记指数和表达层次要高于其他二者。3．171例普查人群内镜活检标本中，流行病学诊断试验评价方法计算结果显示在食管癌癌前病变即食管上皮的非典型增生诊断的评价指标分别为：MCM2的敏感度为91.3％，特异度为61.8％，准确度为73.7％，阳性预测值为61.8％，阴性预测值为91.3％。均优于PCNA和Ki67。4．脱落细胞标本的癌和癌旁部位，MCM2的平均阳性细胞数均高于PCNA和Ki67。结论：1．MCM2的表达和食管鳞状上皮细胞癌的分化级别相关，从高分化→中分化→低分化食管癌中，MCM2的标记指数越来越高，MCM2的标记指数是判断食管癌恶性程度的一个重要指标。2．在食管癌变过程上皮中，MCM2的标记指数逐渐增高，其中在非典型增生和原位癌中，MCM2的标记指数要高于PCNA和Ki67，在单纯性增生和正常食管上皮中，PCNA略高于MCM2和Ki67。3．MCM2对非典型增生诊断的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值均高于PCNA和Ki67。4．在食管癌和癌旁粘膜表面脱落细胞中，平均阳性细胞数MCM2高于PCNA和Ki67，提示MCM2作为食管癌早期诊断指标优于PCNA和Ki67。