人脐血间质干细胞向神经元样细胞诱导分化和移植的实验研究

论文摘要

目的1.建立体外培养、扩增人脐带血间充质干细胞（MSCs）的方法,探讨其生物学特性。2. 探讨来源于人脐血的间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）分化成神经元样细胞的可行性。3. 观察移植源于人脐血间质干细胞诱导分化的神经元样细胞是否可以促进大鼠脊髓损伤的行为和功能恢复。方法1.无菌条件下取正常足月剖腹产的脐带血,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的MesencultTM作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层,测定MSCs 的生长曲线。2.培养和纯化后获得贴壁细胞,取扩增第三代后的MSCs 向神经元样细胞诱导分化。用免疫荧光标记方法检测神经元特异性标记物。3.25 只SD 大鼠随机分成移植组和对照组. 建立NYU 脊髓损伤模型移植组移植5-溴脱氧尿核苷（Brdu）标记的源于脐血的MSCs 在体外培养、扩增,并向神经元样细胞分化的细胞。用免疫荧光标记方法检测神经元特异性标记物。对照组注射PBS液.采用BBB 评分标准对移植组和照组所有大鼠术前和术后24h,1, 2, 3, 4,5 周进行运动功能评价.组织学和免疫组化分析移植细胞的定位和分化情况。结果1.来源于脐血的单个核细胞在体外用合适的培养基培养,细胞贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞,间充质细胞为成纤维样的细胞形态,并表达MSCs相关的抗原与源于骨髓的MSCs 一致。2. 无菌条件下收集正常足月剖腹产的脐带血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的MesencultTM 作为培养基进行培养和纯化,获得贴壁细胞,取扩增第三代后的MSCs向神经元样细胞诱导分化。用免疫荧光标记方法检测神经元特异性标记物。3. 免疫组化标记显示经诱导后的MSCs 表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）,神经丝蛋白（NF）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）.移植后在脊髓病理切片中出现Brud 标记的移植细胞.神经功能检测发现一周后移植组功能恢复较对照组具有显著性差异（p<0.05）。结论1.脐带血中含有的MSCs 可在体外培养、扩增,能够为实验和临床的应用提供一种新的间充质干细胞来源。2. 源于脐血的MSCs 在体外可以培养、扩增,并向神经元样细胞分化,能作为神经干细胞的来源而用于实验研究和临床应用。

论文目录

• 前言
• 第一部分 人脐血间充质干细胞的生物学特性及分离培养研究
• 摘要
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 人脐血间充质干细胞的分离培养与向神经元样细胞诱导分化的实验研究
• 摘要
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 人脐血间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化及促进大鼠脊髓损伤神经恢复
• 摘要
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 英文缩略词表
• 攻读学位期间发表的论文、论著
• 致谢