论文摘要
目的:研究肺癌侧群细胞（SP）与非侧群细胞（non-SP）中miRNAs表达谱差异,进一步研究miRNAs在SP中的功能。方法:1.利用Hoechst 33342染料法,通过流式细胞仪紫外激光分选出A549细胞中的SP细胞和non-SP细胞。2.流式检测SP与non-SP细胞周期。3.利用miRNA芯片检测系统进行SP与non-SP细胞miRNA表达谱差异分析。4. QPCR验证芯片结果。5.流式检测靶基因蛋白。6.利用脂质体转染法将miRNAs转染至SP与non-SP细胞。7. CCK-8法检测转染miRNAs对SP及non-SP细胞增殖的影响。8.流式检测转染miRNAs前后SP细胞比例变化及SP细胞周期的变化。结果:1. A549细胞中存在约1.1%比例的SP细胞,经过ABCG2通道抑制剂维拉帕米阻断后,比例降为0.2%。2.与non-SP相比,SP细胞中绝大部分细胞处于静止期（G0/G1）。3.与non-SP相比,let-7,miR-29,miR-31在SP细胞中显著低表达。4.转染anti-let-7e、anti-miR-29c显著促进SP细胞增殖,加速G1-S期转换;相反,转染anti-miR-31阻碍SP增殖,并且维持SP细胞处于G0/G1静止期状态。而共转染anti-let-7e -miR-31同样阻碍SP增殖,并且维持SP细胞处于G0/G1静止期状态。5.在有利于SP分化的含血清培养条件下,转染anti-let-7e加速SP细胞分化,加快SP比例下降;转染anti-miR-31阻碍SP细胞分化,减缓SP比例下降;而共转染anti-let-7e -miR-31同样阻碍SP细胞分化,减缓SP比例下降。结论:miR-31在SP中的低表达对维持SP细胞处于未分化状态具有重要作用。低表达的miR-31和let-7相互平衡调控着SP细胞自我更新和多向分化功能。miR-31在SP中低表达维持肺癌SP细胞处于静止期,抑制SP细胞分化;而let-7低表达加速G1-S期转换,促进SP细胞增殖与分化。低表达miR-29同样加速G1-S期转换,维持肺癌细胞高增殖能力,但不影响SP细胞分化。
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