海南岛番石榴病原根结线虫种类鉴定研究

论文题目: 海南岛番石榴病原根结线虫种类鉴定研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 植物病理学

作者: 芮凯

导师: 陈绵才

关键词: 番石榴,根结线虫,种类鉴定,形态学,同工酶,线粒体,湛江根结,线虫,番禺根结线虫,南方根结线虫

文献来源: 华南热带农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 根结线虫是一类在农作物上为害极大的植物寄生性线虫,根据国内外的资料报道,到目前为止,已描述的根结线虫已有90多种。番石榴是海南省栽培的一种热带珍稀特色水果,根结线虫对其为害相当严重,由于对该病害缺乏适当的防范技术,造成移栽苗至少有60%带病,移植一年以上的果园番石榴株发病率也很高,移栽时未采取防治措施或措施不得当,一年内可造成大量死株,能存活者亦大多长势衰弱,三年后整园毁灭。而所有番石榴品种对根结线虫高度敏感是该病逐年加剧的关键因素。据对已挂果的3龄以上果园抽样调查,果园和植株发病率均为100%,根结指数为3.0以上。目前,国外报道的2种为害番石榴的根结线虫为M.africana和M.megadora,国内殷友琴和陈绵才也曾报道过,但未见对番石榴病原根结线虫进行系统性研究。 利用线虫的比较形态学、同工酶电泳和线粒体DNA标记相结合的方法来进行根结线虫的分类鉴定,是近年来在国际根结线虫分类领域出现的一个先进的方法,它在分类上的客观性和准确性已得到国际的公认。本研究运用形态学方法,结合同工酶电泳和线粒体DNA标记技术,将采自海南岛海口、文昌、琼海、三亚、乐东、澄迈等10市县番石榴产区的25个番石榴根结线虫种群鉴定为湛江根结线虫、番禺根结线虫和南方根结线虫,其中湛江根结线虫和番禺根结线虫两个种为近两年鉴定的新种。在所鉴定的28个纯化种群中,有25个种群为湛江根结线虫(Meloidogyne zhanjiangensis n. sp Liao,2001),占鉴定总数的89.3%;2个为番禺根结线虫(M.panyuensis Liao,2001),占7.1%;1个为南方根结线虫[M.incognita(Kofoid and White,1919)Chitwood,1949],占3.6%。表明湛江根结线虫是为害海南岛番石榴的优势种群。在所采集的25个原始种群中,3个为混合种群,其中2个为湛江根结线虫与番禺根结线虫的混合种群,1个为湛江根结线虫与南方根结线虫的混合种群。由此可见湛江根结线虫是寄生于海南番石榴上的主要根结线虫,这为今后开展根结线虫病的防治,特别是对根结线虫的抗性筛选工作提供了重要依据。 运用常规聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对纯化培养的28个种群年青雌虫的酯酶、苹果酸脱氢酶进行电泳分析。参照Esbenshade等(Esbenshade,1985,1990)和廖金铃(廖金铃博士论文,2001)的研究报道,28个种群中,25个种群的酯酶谱型为VS1-S1,苹果酸脱氢酶谱型为N1a,和已报道的湛江根结线虫相同;2个种群的酯酶谱型为

论文目录:

1 前言

1.1 根结线虫研究的发展史

1.1.1 最初的认识阶段(1855～1878)

1.1.2 混乱时期(1879～1948)

1.1.3 成熟时期(1949～现在)

1.2 根结线虫分类现状

1.3 我国根结线虫分类学研究

1.4 根结线虫的致病性和植物对根结线虫的抗性

1.5 根结线虫对海南岛番石榴的危害

1.6 研究的目的和意义

1.7 技术路线

2 材料与方法

2.1 线虫种群的采集

2.2 线虫种群的保存

2.3 纯化培养

2.4 种类鉴定

2.4.1 主要形态特征观察

2.4.2 各虫态的获得

2.4.2.1 固定

2.4.2.2 甘油—酒精脱水法

2.4.3 制片

2.4.4 会阴花纹制作及形态观察

2.4.5 雌虫形态观察及形态测计

2.4.6 雄虫形态观察及形态测计

2.4.7 二龄幼虫形态观察及形态测计

2.4.8 测量值的统计分析

2.5 酯酶(EST)和苹果酸脱氢酶(MDH)电泳

2.5.1 试剂配制

2.5.2 操作步骤

2.5.2.1 制板

2.5.2.2 灌胶

2.5.2.3 供试线虫的选择

2.5.2.4 酶的提取

2.5.2.5 点样

2.5.2.6 电泳

2.5.2.7 剥胶

2.5.2.8 染色

2.5.3 固定和照相

2.5.4 确定线虫种类

2.6 线粒体DNA鉴定

2.6.1 DNA提取

2.6.2 PCR扩增反应

2.6.2.1 引物

2.6.2.2 反应体系

2.6.2.3 扩增条件

2.6.2.4 电泳

3 结果与分析

3.1 根结线虫种类鉴定

3.1.1 形态鉴定结果

3.1.2 同工酶鉴定结果

3.1.3 线粒体DNA在鉴定中的应用

3.2 最终鉴定结果

3.3 种类描述

3.3.1 湛江根结线虫

3.3.2 番禺根结线虫

4 结论与讨论

4.1 番石榴根结线虫的主要种类

4.2 我国根结线虫的种类与分布

4.3 根结线虫的分类依据

4.3.1 会阴花纹的分类价值

4.3.2 同工酶在分类鉴定中的应用

4.3.3 线粒体DNA在分类鉴定中的应用

4.3.4 rDNA-ITS在分类鉴定中的应用

4.3.5 SCAR在分类鉴定中的应用

4.3.6 根结线虫分类的发展趋势

4.4 本研究的意义和存在的问题

4.5 抗病育种存在的问题

参考文献

本文缩写及英汉对照

形态学方法中测计的一些缩写

附录1

附录2

附图

致谢

发布时间: 2005-07-27

参考文献

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