蚓激酶基因在山羊乳腺中的表达及其转基因小鼠的建立

论文摘要

本试验首先在山羊乳腺组织进行了蚓激酶的表达研究,然后利用逆转录病毒转染小鼠精原干细胞,旨在建立蚓激酶转基因小鼠,为最终获得其转基因山羊乳腺生物反应器奠定基础。首先将含有山羊β-酪蛋白基因（β-casein）5’区调控序列（BCP）、蚓激酶基因（lumbrokinase）以及牛生长激素基因polyA（BGHpolyA）序列的表达盒克隆到骨架为Moloney 小鼠白血病病毒（MoMLV）、含有标记基因NeoR 的逆转录病毒载体pLNCL 中,构建了蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LKR。将其转染泌乳期奶山羊乳腺小叶,蚓激酶基因在乳腺组织实现了有效表达; 进而在脂质体介导下将pLN-BCP-LKR 质粒转染包装细胞PA317,获得可持续产生病毒颗粒的细胞克隆;利用重组逆转录病毒转染妊娠期奶山羊乳腺,在泌乳期采集乳汁检测蚓激酶表达,结果显示,蚓激酶在乳腺中实现了稳定表达。在上述试验基础上,将重组逆转录病毒制成转染液,单侧注射3 周龄公鼠睾丸曲细精管。待其发育成熟后,利用该公鼠进行繁殖,对获得的子代鼠进行目的基因的PCR 及Southern blotting 检测,结果显示:本试验获得了转基因小鼠,阳性率为8.8%。

论文目录

• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 蚓激酶相关研究
• 第二章 动物转基因技术研究进展
• 第三章 逆转录病毒载体在转基因中的应用
• 第二篇 研究内容
• 第一章 蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LKR的构建及其在山羊乳腺组织中瞬时表达
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 第二章 蚓激酶重组逆转录病毒的包装及其在山羊乳腺组织中稳定表达
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 第三章 体内转染精原干细胞建立蚓激酶转基因小鼠
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致 谢
• 导师简介