论文摘要
目的:当归为伞形科植物当归Angelica sinensis （Oliv）Diels的根,其主要成分为阿魏酸、挥发油、多糖等。研究表明,多糖是当归的活性成分,具有调节免疫、抗肿瘤、降血脂等生物活性;且酸性多糖,特别是APS-3b对荷瘤小鼠S-180及多种体外培养的肿瘤细胞有明显的抑制作用,但当归粗多糖并无明显抑制作用,这提示当归多糖的结构与抗肿瘤活性有密切联系。本研究通过糖链特异性工具酶对当归均一性多糖APS-3b进行控制酶解,分离纯化得到不同结构的多糖片段,考察其抗肿瘤活性,为当归多糖结构与活性关系研究提供依据。方法:（1）采用实验室建立的工艺提取当归（Angelica sinensis （Oliv）Diels）粗多糖,利用凝胶柱色谱和离子交换色谱对当归总多糖进行分离纯化,得到多种酸性当归多糖;用高效尺寸排阻色谱法、旋光度测定、苯酚-硫酸法、气相色谱法等分析方法对酸性多糖的结构特征进行鉴定。（2）针对APS-3b的结构特征采用聚半乳糖醛酸酶、纤维素酶、β-半乳糖苷酶对其进行酶解,得到多种酶解片段并用高效尺寸排阻色谱法测定其均一性。（3）体外实验采用,MTT方法测定酸性多糖及其酶解片段对体外培养的人肝癌细胞（HepG2）、人宫颈癌细胞（HeLa）、人结肠癌细胞（SW-116）增殖的影响。体内观察,采用小鼠肉瘤S-180移植模型,测定当归酸性多糖及其酶解片段体内肿瘤抑制的影响。（4）采用高效液相色谱法对酸性多糖及活性突出的酶解片段进行单糖组成分析。结果:（1）从当归总多糖中分离纯化得到的5种酸性当归多糖APS-2b、APS-3b、APS-1c、APS-2c、APS-3c,高效尺寸排阻色谱中均呈现单一对称峰,表明均为均一性多糖。采用气相色谱法测出APS-2b、APS-3b、APS-1c、APS-2c和APS-3c的单糖组成各不相同。（2）采用聚半乳糖醛酸酶、纤维素酶、β-半乳糖苷酶对APS-3b降解得到5个不同的酶解片段。用高效尺寸排阻色谱法对这5个片段进行了均一性及分子量的测定,其中3b-GAEH-3的色谱峰测定结果为非单一对称峰,3b-GAEH-1、3b-GAEH-2、3b-GLEH、3b-GAAEH均呈单一对称峰且重均分子量分别为3.12×104 Da、1.29×104 Da、1.01×105 Da、8.9×103 Da。（3）酸性当归多糖及其酶解片段对3种人肿瘤细胞增殖的作用有所不同,其中酶解片段3b-GAEH-2和3b-GAAEH有明显的肿瘤细胞增殖抑制作用,且呈现剂量依赖性。酸性当归多糖及其酶解片段3b-GAEH-2和3b-GAAEH对荷瘤小鼠S-180的抑瘤作用也有不同, 50mg/kg的3b-GAEH-2和3b-GAAEH抑瘤率分别为43.66%、49.65%;均高于100mg/kg的酸性当归多糖APS-2b、APS-3b、APS-1c、APS-2c和APS-3c。（4）用高效液相色谱法测出酶解片段3b-GAEH-2的单糖组成是Ara-Gal-Glc-Rha,摩尔比为8.4:2.7:1.8:1.0;3b-GAAEH的单糖组成为Gal-Rha-Glc-Ara摩尔比为9.8:2.5:1.2:1.0。结论:当归多糖结构与抗肿瘤活性有密切相关,酸性当归多糖均有一定的体内抗肿瘤活性,其中以阿拉伯糖和半乳糖为主要组成单元的片段3b-GAEH-2和3b-GAAEH抗肿瘤活性最强,可能是当归多糖的抗肿瘤活性单元。
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