朝药关苍术抗乙醇性胃粘膜损伤有效部位及机制研究

论文摘要

目的：通过①关苍术不同提取部位对乙醇诱导的胃粘膜损伤的影响实验筛选主要活性部位,及探讨关苍术主要活性部位对乙醇诱导的胃粘膜损伤预防保护作用的作用机制；②采用GC-MS技术分析测定关苍术超临界提取物中主要化学成分,并利用HPLC方法比较关苍术超临界提取物中atractylenoideⅠ、atractylenoideⅢ含量,确定关苍术中胃粘膜预防保护作用的主要活性部位及其可能成分。方法：①采用超临界-C02法萃取得关苍术超临界提取物（GCC）,萃取后的药渣加乙醇做为夹带剂继续同条件下萃取,得到加乙醇夹带剂的超临界提取物（GCCY）。超临界萃取后的药渣水提,并用正丁醇萃取,得到水层（GCS）和正丁醇层（GCZ）两部分提取物。建立乙醇诱导的小鼠胃溃疡模型,灌胃给予上述四种提取物,连续给药5天后,测量胃溃疡面积和胃组织中NO、PGE2的含量变化,探讨该四种提取物对该种胃粘膜损伤的影响,并找出起胃粘膜保护作用的主要提取部位GCCY。②建立乙醇诱导的大鼠胃溃疡模型,分别灌胃给予0.35 g/Kg/d和0.70 g/Kg/d的GCCY,连续给药5天后,测量胃溃疡面积和胃组织中MDA、MPO、NO含量和SOD、NOS活性,并测定COX-2蛋白表达,进一步探讨该提取部位起胃粘膜保护的主要作用机制。③采用GC-MS技术分析测定关苍术超临界两种萃取物,将鉴定出的两种萃取物的主要成分进行比较。气相色谱条件为进样口温度200℃,起始温度40℃,保留1 min,以5℃/min,升温至140℃,以10℃/min,升温至250℃,保留5 min,载气He；分流比50：1,恒流,1.00 mL/min,电离方式EI,电离电压70 eV,连接杆温度280℃,离子源温度280℃,质谱库为NIST8.0LIB。④采用高效液相色谱（HPLC）法测定关苍术提取物中atractylenoideⅠ与atractylenoideⅢ含量,色谱条件为流动相为甲醇-乙腈（60：40）,检测波长210 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为室温。结果：①与模型组相比,关苍术的三种提取物GCCY、GCC和GCZ均可明显降低小鼠胃溃疡指数（P<0.01）,GCCY组小鼠胃粘膜中NO含量明显增加（P<0.05）,GCCY组和GCC组粘膜中PGE2含量明显增加。②GCCY0.35 g/Kg/d和0.70 g/Kg/d剂量组与模型组相比均一定程度的减少胃粘膜损伤面积。与模型组相比,GCCY的两个剂量组的MDA（P<0.01）和MPO均显著降低（P<0.05）,同时SOD明显升高（P<0.05）；高剂量乙醇上调大鼠胃组织中COX-2表达,而GCCY 0.35 g/Kg/d剂量组COX-2表达显著降低。③通过GC-MS技术对GCC和GCCY进行检测,共分辨出71和49个峰,分别鉴定出其中53和25个成分,峰面积归一化法测定它们的相对百分含量,含量总和分别占GCC、GCCY总量的98.56%和94.33%。与GCC相比,GCCY中有一种特有成分,为乙酸乙酯。④HPLC测得atractylenoideⅠ和atractylenoideⅢ在GCC中的含量高于GCCY。结论：①关苍术超临界提取物GCC、GCCY对乙醇诱导的胃粘膜损伤均有预防保护作用,其中GCCY的保护作用较强。GCCY可能通过降低MPO及自由基对生物膜的损害；通过维持胃粘膜中NO水平,下调COX-2基因表达,起到预防胃黏膜损伤的重要作用。②GC-MS分别鉴定出GC、GCCY中53和25个成分。与GCC相比,GCCY中有1种特有成分为乙酸乙酯,可能为乙醇夹带剂带入的杂质；有四种成分的相对百分含量明显高于GCC。③AtractylenoideⅠ和atractylenoideⅢ在GCC中的含量高于GCCY,关苍术中可能还存在atractylenoideⅢ之外的其他胃粘膜保护成分,GCCY较GCC相对百分含量较高的成分也可能是胃粘膜保护成分。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 引言
• 第二章 仪器、材料与试剂
• 2.1 主要仪器
• 2.2 实验材料
• 2.3 试剂
• 2.4 实验动物
• 第三章 关苍术不同提取物对小鼠乙醇性胃粘膜损伤初探
• 3.1 关苍术不同提取物的制备
• 3.2 对小鼠乙醇性胃粘膜损伤初探
• 3.3 讨论
• 第四章 关苍术提取物对大鼠乙醇性胃粘膜损伤的影响及机制研究
• 4.1 实验方法
• 4.2 实验结果
• 4.3 讨论
• 第五章 关苍术超临界提取物主要成分分析
• 5.1 GC-MS分析
• 5.2 HPLC测定关苍术超临界提取物中atractylenoideⅠ和atractylenoideⅢ含量
• 5.3 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A （攻读学位期间发表论文目录）
• 综述
• 参考文献