论文摘要
目的探讨新型重组腺病毒真核表达载Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1及Ad-CMV-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1转染骨髓间充质干细胞（bMSCs）后目的基因的表达及其对bMSCs成骨能力的影响并联合新型人工载体支架A-W-MGC/CS所构建的组织工程骨观察体内修复骨缺损的能力。方法（1）提取并扩增本实验室已成功构建好的腺病毒质粒Ad-CMV-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1及Ad-CMV-BMP-2 -IRES-hrGFP-1酶切后电泳并凝胶回收测质粒浓度。（2）在HEK293A细胞中包装病毒获得Adv-CMV-HIF-1αmu1及Adv-CMV-BMP-2并检测病毒滴度。（3）体外培养兔骨髓间充质干细胞。测定最佳感染指数（MOI）,并以最佳MOI感染MSCs。（4）以Adv-CMV-HIF-1αmu1及Adv-CMV-BMP-2基因转染bMSCs为实验组,Adv-CMV-BMP-2基因转染bMSCs为阳性对照组,未转染基因bMSCs为阴性对照组, ALP检测试剂盒检测3组细胞的ALP活性;（5）将新型人工载体A-W-MGC/CS载体支架材料进行表面修饰,并同多糖生物膜（PSBM）包好,制作骨缺损动物模型。将感染两种基因的MSCs与处理好的骨组织工程载体复合,植入骨缺损的动物模型体内。实验分组:A.实验组:BMP-2+HIF-1αmu+A-W-MGC/CS+PSBM;B.阳性对照组:BMP-2+A-W-MGC/CS+PSBM; C.阴性对照组:A-W-MGC/CSD.自体骨移植组:自体骨+PSBM;（6）分别于术后4周、8周、12周各时间点取材,各组通过大体观察,X线检查、组织学观察,生物力学检测,墨汁灌注法等指标观察实验组及对照组骨缺损修复情况,探讨骨修复愈合机制。结果1.通过碱性磷酸酶检测发现HIF-1αmu可以促进BMP-2表达,使ALP分泌增加。2.A组12周后骨缺损完全修复,支架材料基本降解,且骨塑形较好;A组新生骨的数量及质量优于B组。B组修复效果缓慢。C组骨缺损未修复,主要由纤维结缔组织和部分载体材料填充,D组骨缺损完全修复,A组与D组修复效果基本一致。3.12周后A组血管墨汁灌注密度较B组高,与D组基本一致,C组较少见墨汁。结论1.腺病毒介导的HIF-1αmu可以上调BMP-2表达促进向成骨方向分化。2.腺病毒介导的HIF-1αmu及BMP-2联合A-W-MGC/CS所构建的新型组织工程成骨具有良好的生物活性,并使缺损区血流量增加后修复大段骨缺损取得显著疗效,与自体骨移植效果基本一致,较单一使用BMP-2所构建的组织工程成骨对修复大段骨缺损疗效显著。
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标签：骨形态发生蛋白论文; 低氧诱导因子论文; 重组腺病毒载体论文; 骨髓间充质干细胞论文; 血管生成论文; 组织工程论文; 骨缺损论文;