论文摘要
脂肪含量是影响肉质的重要指标,是目前猪育种工作的重点,其合成和分解过程中的限速酶的活性影响着脂肪的沉积。酰基辅酶A合成酶长链4（Acly-CoA synthetase long chain family 4,ACSL4）在脂肪酸代谢过程中起着关键的作用,通过两个步骤催化游离的脂肪酸和辅酶A,在ATP和镁离子的存在下生成脂肪酰基辅酶A合成酶,参与脂肪酸的合成和分解代谢过程。本研究以野猪、家猪和野家杂交猪利用比较基因组学和生物信息学方法对ACSL4基因全长编码区进行了结构分析及进化分析;利用RT-PCR方法进行了ACSL4的组织表达分析;利用PCR-SSCP方法进行了猪（品）种间多态性分析。主要研究结果如下:1.首次克隆了野猪ACSL4基因的全长编码区序列（GenBank accession No:EU553523）,和大白猪的该基因及部分序列（GenBank accession No:EF641277）,野猪和大白猪在编码区上存在着3个碱基的变异（A1015G、T1468C、T1469C）,在氨基酸水平上存在着2个氨基酸（R339G、F490P）变异。生物信息学分析发现,在多肽链的234-245位置处存在一个潜在的AMP结合位点,表明ACSL4基因是受腺苷酸结合蛋白调控的。利用邻接法构建了ACSL4基因的分子进化树,其中,猪与牛同源性较高,与鸡的变异程度较大,处于进化树的最外围。基因组结构分析表明,猪ACSL4基因含有14个外显子和13个内含子。2.利用RT-PCR方法构建了ACSL4基因在野猪、大白猪和野家杂交猪中的组织表达谱,结果表明该基因在猪肌肉、子宫、肾、脾、心和肺中表达;对ACSL4基因在大白猪和野家杂交猪同一组织中表达的比较研究表明,在肾、脾、肺、心、子宫和肌肉等组织中,大白猪的表达量要高于野家杂交猪。3. PCR-SSCP分析发现,在ACSL4基因的外显子8、11和14上存在着4个点突变,引起了蛋白质多肽链上R339G、F490P、G656W氨基酸的变化;在3’UTR区检测到两个突变位点。群体遗传学分析发现,所检测到的多态位点基因型频率分布与品种相关联。