柴胡皂苷-d体外抗支原体作用及人型支原体生长规律的研究

论文摘要

支原体感染可以引起人类多个系统的疾患。临床上对支原体感染的治疗多选用抗生素,一般所选用的抗生素主要包括大环内酯类、四环素类、喹诺酮类。支原体感染的增加以及治疗中抗生素的滥用,对支原体的药物治疗已经变得越来越棘手,耐药的菌株和患者变得越来越多。甚至对一些新近使用的抗生素,如加替沙星,也在临床上有了耐药的患者。还存在一些患者用药几个疗程后反复支原体阳性迁延不愈。因此,寻找新的更加有效的抗生素与治疗的新途径和方法是许多临床医生和实验室所努力的方向。人型支原体是泌尿生殖道感染,尤其是女性泌尿生殖道感染的常见病原之一,也可引起生殖道外感染,如:创伤感染、支原体血症、关节炎、脑膜炎,国外还有报道引起心内膜炎纵隔炎及心肺移植的失败,儿童在肾移植应用免疫抑制剂后,引起人型支原体感染的脓毒性关节炎等,国内的大多数实验室对人型支原体的研究较少,无论广度和深度都十分有限,还存在着不少问题,例如:临床分离率不确定、传代后菌种活力下降、生长不稳定等。本课题研究旨在:了解人型支原体的生长特性并从临床分离到一定数量的人型支原体和解脲脲原体菌株;解决分离支原体过程中真菌污染的问题;明确柴胡皂苷-d在体外对支原体的抑制活性。第一部分:柴胡皂苷-d体外抗支原体作用的研究该部分研究柴胡皂苷-d在体外对支原体的抑制活性,揭示其新的活性作用,为寻找新的抗支原体药物提供依据。采用液体微量稀释法,测定柴胡皂苷-d对人型支原体、解脲脲原体和肺炎支原体的最低抑菌浓度（MIC）。用96孔板做MIC共十个浓度,设阴性对照与阳性对照。在判读结果后,各浓度孔再滴种固体培养基,看有无支原体生长,得出最低杀菌浓度（MBC）。柴胡皂苷-d对各种支原体的MIC在4—16ug/ml,MBC在8—32ug/ml。对解脲脲原体的MIC50为8ug/ml,MIC90为16ug/ml。对解脲脲原体的MBC50为8ug/ml,MBC90为16ug/ml。对解脲脲原体、人型支原体、肺炎支原体三种标准株的MIC及MBC分别为8、16、8ug/ml及16、16、16ug/ml。结果表明柴胡皂苷-d在体外对支原体有较强的活性,能作为抗支原体新药进行深入研究。第二部分:人型支原体的生长特性及临床分离方法该部分对人型支原体的生长曲线、菌落形态演变等生物学特性及临床分离方法进行研究。选择了氟康唑加入支原体培养基中,使其浓度达到31.25ug/ml,能有效防止培养基中真菌的污染。妇科阴道标本临床分离的人型支原体阳性率为8.62%;研究明确了在固体培养基上人型支原体菌落的生长演变过程:得到了人型支原体特有的生长曲线;并由此确定人型支原体在液体中繁殖一代所需的时间和对数生长期、及液体生化反应的pH值颜色改变规律。人型支原体在液体培养基中分解精氨酸产碱能力较弱,不会使液体培养基颜色变得很红,根据培养基pH值颜色变化不宜作为诊断人型支原体的方法。人型支原体在固体培养基上,在48个小时左右,显微镜下可看到典型的特征性‘油煎蛋’菌落。在液体培养基中人型支原体的传代以及保种在40小时为宜,即1/2对数生长期最好。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 符号说明
• 第1章 引言
• 1.1 概述
• 1.2 支原体感染治疗新进展
• 1.3 柴胡抗菌成分研究现状
• 1.4 柴胡皂苷的结构及活性研究
• 第2章 柴胡皂苷-D对支原体的体外作用研究
• 2.1 概述
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.3.1 总皂苷及三种单体对解脲脲原体的作用
• 2.3.2 Sd对解脲脲原体和人型支原体临床株的结果
• 2.3.3 Sd对三种标准株的结果
• 2.4 讨论
• 2.5 结论
• 第3章 人型支原体的生长规律研究
• 3.1 概述
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 试验所需耗材和器材
• 3.2.3 方法
• 3.2.3.1 Mh生长曲线
• 3.2.3.2 Mh不同时间菌落形态
• 3.2.3.3 Mh液体培养基颜色及pH变化
• 3.2.3.4 临床标本处理
• 3.2.3.5 Mh纯化保存方法
• 3.2.3.6 抗真菌抑菌剂的确定
• 3.2.3.7 抑真菌剂浓度的确定
• 3.3 结果
• 3.3.1 Mh的生长曲线
• 3.3.2 菌落形态的演变
• 3.3.3 Mh液体培养基的颜色变化
• 3.3.4 Mh的临床分离
• 3.3.5 培养基中抑真菌剂的选择
• 3.3.6 抑真菌剂浓度的确定
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第4章 结论与展望
• 4.1 结论
• 4.2 进一步工作的方向
• 致谢
• 参考文献
• 个人简历 在读期间发表的学术论文
• 附录