SRAP对不同地理种源红松遗传结构的研究

论文摘要

应用SRAP分子标记技术对红松24个地理种源进行研究;首次建立了红松SRAP-PCR反应体系;分析了不同种源的遗传多样性及遗传分化;探讨了遗传结构与生长性状的相关性。结果如下:（1）总DNA的提取采用CTAB法,并加以改进。改进后从红松针叶中所提取的总DNA得率和纯度较高,能满足PCR反应的需要。（2）首次将SRAP技术应用于红松中,建立了红松最优SRAP-PCR的反应体系及扩增程序。在20μL的体系中:1×Buffer,Mg2+2.5mmol/L,dNTPs0.15mmol/L,引物0.15μmol/L,DNA 40～100ng,Taq酶1.5U;共35个循环;前5个循环为94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸30s;后30个循环仅将复性温度升为50℃;最后72℃延伸7min。（3）9对SRAP引物对红松24个种源共计240个样本进行了扩增,共得到249条条带,其中多态性条带143条,多态位点比率（P）为55.42%,平均每对引物扩增出15.9个多态位点,在已发表的植物中处于较高水平。（4）多态位点比率（P）、有效等位基因数（Ae）、Nei指数（H）和Shannon信息指数（I）反映出的24个种源遗传多样性水平趋于一致,均为大海林种源遗传多样性最高,八家子最低。经方差分析,24个种源间遗传多样性水平差异不显著。（5）24个种源红松的种源内遗传变异占总的遗传变异的92.35%,种源间的占7.65%,遗传变异主要来自种源内部。红松24个种源间基因流Nm为2.9069,表明红松种源间有较高水平的基因流动,能有效防止基因空间异质性。（6）24个种源红松的树高和胸径生长量经方差分析,表明两者在24个种源间均不存在显著性差异,所得结果与遗传多样性指数分析结果一致。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 林木地理变异与种源研究现状
• 1.1.1 林木的地理变异及其形成机理
• 1.1.2 种源与种源试验
• 1.1.3 种源的研究现状
• 1.2 分子标记
• 1.2.1 常用分子标记简介
• 1.2.2 SRAP分子标记及国内外应用概况及前景
• 1.3 红松概述
• 1.3.1 红松的地理分布
• 1.3.2 红松的生物学特性
• 1.3.3 红松的价值
• 1.3.4 国内外红松的研究概况
• 1.4 本研究的目的及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 露水河红松种子园自然概况
• 2.1.1 研究地点的地理位置及地形条件
• 2.1.2 研究地点的气候条件
• 2.2 实验材料
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 红松针叶总DNA的提取与检测
• 2.3.2 红松SRAP-PCR反应体系的建立及优化
• 2.3.3 引物筛选
• 2.3.4 PCR扩增产物检测
• 2.3.5 数据分析与应用软件
• 3 结果与分析
• 3.1 红松针叶总DNA提取
• 3.2 红松SRAP-PCR反应体系的建立与优化
• 3.2.1 SRAP-PCR单因子试验结果与分析
• 3.2.2 正交试验结果与分析
• 3.3 SRAP-PCR扩增程序的优化
• 3.3.1 延伸时间对SRAP-PCR的影响
• 3.3.2 循环次数对SRAP-PCR的影响
• 3.3.3 预变性的选择对SRAP-PCR的影响
• 3.4 不同种源红松的遗传多样性分析
• 3.4.1 不同种源红松多态位点比率
• 3.4.2 不同种源红松遗传多样性指数
• 3.4.3 不同种源红松的遗传分化
• 3.4.4 不同种源红松的基因流格局
• 3.4.5 不同种源红松的遗传距离与遗传一致度
• 3.5 不同种源红松的生长性状比较
• 3.5.1 不同种源红松树高统计分析
• 3.5.2 不同种源红松胸径统计分析
• 3.6 不同种源红松遗传多样性与生长性状比较
• 3.6.1 不同种源红松遗传多样性与树高比较
• 3.6.2 不同种源红松遗传多样性与胸径比较
• 4 讨论
• 4.1 红松针叶总DNA的提取
• 4.2 红松SRAP-PCR反应体系的建立及优化
• 4.3 不同种源红松遗传多样性及遗传分化
• 4.3.1 不同种源红松多态位点比率
• 4.3.2 不同种源红松遗传多样性水平
• 4.3.3 不同种源红松的遗传分化和基因流格局
• 4.4 不同种源红松遗传多样性水平与生长性状比较
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢