Urocortin抑制血管内皮生长因子改善糖尿病肾病

论文摘要

糖尿病肾病是糖尿病最常见、最严重的慢性微血管并发症之一,是糖尿病患者的主要死亡原因。因此,积极寻求有效措施防治糖尿病肾病具有重要意义。临床上,糖尿病肾病主要表现为蛋白尿、高血压、进行性肾功能损害。肾小球系膜细胞（GMCs）增殖、细胞外基质（ECM）堆积引起的系膜扩张是该病发展过程中的一个重要病理改变。血管内皮生长因子（VEGF）由于其强大的促血管通透性以及促进细胞增殖、分化,改变ECM,促血管生成等功能介导了糖尿病肾病蛋白尿的产生以及系膜扩张等重要病理变化,在糖尿病肾病发病中的作用越来越受到人们的关注。Urocortin（UCN）是促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）肽类家族中的新成员,自被发现以来,其在心血管系统功能调节中发挥的多方面重要作用被不断证实,并且UCN能显著减少大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）VEGF的释放,抑制VSMCs增殖,抑制毛细血管形成。本实验室在体实验发现UCN通过下调肝癌组织VEGF水平抑制肿瘤生长和新生血管的生成。本研究探讨UCN对糖尿病肾病大鼠肾脏组织VEGF表达的影响,进而探索UCN对糖尿病肾病发生发展的影响及其作用机制。采用小剂量多次注射链脲菌素（STZ）联合弗氏完全佐剂（CFA）同时辅以高脂饮食的方法建立大鼠糖尿病肾病动物模型。自实验开始第7周给药,连续8周每日给予大鼠腹腔注射UCN(6μg·kg-1)或UCN(6μg·kg-1)+astressin(30μg·kg-1),检测大鼠血糖、体重变化,给药结束后检测相关的血清生化、尿液指标,通过H-E染色和PAS染色评价肾脏病变程度,应用RT-PCR方法半定量检测肾脏组织VEGF mRNA表达情况,利用免疫组化技术观察肾小球VEGF、转化生长因子（TGF-β1）的表达。实验结果表明,UCN可以明显降低模型动物的肾脏重量,但是对模型动物的血糖、体重、肾指数均无明显影响;UCN能显著降低模型动物血清中尿素氮、肌酐浓度及丙二醛（MDA）含量,提高肌酐清除率和血清超氧化物歧化酶（SOD）活性;降低模型动物24 h尿量、尿蛋白、尿微量白蛋白排出量,增加尿尿素氮、尿肌酐排出量;减轻肾脏系膜区增宽,基质增多等病理变化;抑制模型动物肾小球VEGF、TGF-β1的过度表达。这些作用绝大多数受CRH受体（CRHR）拮抗剂astressin的影响。本文离体部分用TGF-β1（2 ng/ml）刺激GMCs分泌VEGF,同时给予不同浓度的UCN,孵育12 h。采用Elisa法定量检测细胞上清液中VEGF的含量。结果发现,UCN可以浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导的VEGF的分泌,5×10-9M的astressin减弱了UCN的上述作用。综上所述,在体实验及离体实验均显示,UCN可能通过抑制肾小球VEGF的过度表达参与了其对糖尿病肾病的保护作用,该作用与CRHR有关。该研究为进一步探讨糖尿病肾病的发病机制,寻找防治糖尿病肾病药物的新靶标积累了学术基础和实验依据。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 参考文献
• 第一章 Urocortin对STZ-CFA诱导的糖尿病肾病大鼠模型一般指标的影响
• 引言
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 第二章 Urocortin对STZ-CFA诱导的糖尿病肾病大鼠模型尿液相关指标的影响
• 引言
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 第三章 Urocortin对STZ-CFA诱导的糖尿病肾病大鼠模型血清生化指标的影响
• 引言
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 第四章 Urocortin对STZ-CFA诱导的糖尿病肾病大鼠模型肾脏组织病理学的影响
• 引言
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 第五章 Urocortin对STZ-CFA诱导的糖尿病肾病大鼠模型肾脏组织VEGF、TGF-β1表达的影响
• 引言
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 第六章 Urocortin对TGF-β1刺激的大鼠肾小球系膜细胞VEGF分泌的影响
• 引言
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献