导读:本文包含了重组表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:甘油二酯激酶γ,DGKγ,同源重组,慢病毒载体
重组表达载体论文文献综述
李蕾,谢建山,杜家政,师亮,崔慧林[1]（2020）在《利用同源重组构建大鼠甘油二酯激酶γ(DGKγ)慢病毒过表达载体》一文中研究指出背景:慢病毒载体作为外源性转基因载体已被广泛应用,但是大鼠甘油二酯激酶γ(diacylglycerol kinase γ,DGKγ)基因慢病毒载体未见报道。目的:用同源重组的方法构建大鼠DGKγ慢病毒过表达载体。方法:提取成年SD大鼠脑组织总RNA,以反转录得到的c DNA作为模板,通过PCR反应分段扩增大鼠DGKγ基因CDS区5'端1 029 bp和3'端1 362 bp,用同源重组技术将这2个片段与线性化载体进行定向连接,构建CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体并进行PCR扩增及测序鉴定。经293T细胞包装后产生慢病毒,收集慢病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞中GFP的表达并应用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测细胞中DGKγ mRNA和蛋白的表达。结果与结论:CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体经PCR扩增和测序鉴定构建成功;经CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒感染后的293T细胞,荧光显微镜下呈GFP阳性,实时荧光定量PCR显示DGKγ mRNA的表达较空载体组显着升高(P <0.01),Western blotting显示DGKγ蛋白表达较空载体组极显著升高(P <0.001)。提示:成功构建了大鼠DGKγ慢病毒过表达载体,DGKγ在293T细胞有效高表达。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2020年02期）
尚翠玲,孟佳丽,李昕,王小月,李丹[2]（2019）在《抗菌肽Eumenitin序列修饰后的毕赤酵母重组表达载体构建》一文中研究指出为了构建高效低毒的新型抗菌肽,将抗菌肽Eumenitin及其序列修饰后获得4条新型短肽的毕赤酵母真核表达载体,采用生物信息学方法对Eumenitin及其衍生肽的理化参数进行预测,基因序列经毕赤酵母密码子优化后,克隆至pMD19T-simple载体上,鉴定后连接至毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,构建的重组表达质粒经Avr Ⅱ线性化后,电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,涂布于YPDSZ平板上,进行表型筛选和高拷子筛选,并对5条短肽的溶血率进行测定。结果显示:Eumenitin及其衍生肽均为较稳定的疏水性多肽,空间结构以α螺旋为主,且序列中不含有信号肽。经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,成功构建了5条短肽的毕赤酵母重组表达载体,经设计改造后的抗菌肽溶血性均较低。本研究结果为后续进行重组蛋白的表达以及抑菌活性研究奠定了基础,以期获得抗菌活性强、溶血性低、高表达的新型抗菌肽。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年06期）
李蕾[3]（2019）在《利用同源重组构建大鼠DGKγ慢病毒过表达载体》一文中研究指出目的:用同源重组的方法构建大鼠甘油二酯激酶γ(DGKγ)慢病毒过表达载体,为进一步研究DGKγ在神经上皮细胞的作用机制提供实验基础。方法:提取成年SD大鼠脑组织总RNA,以反转录得到的cDNA作为模板,通过PCR反应分别扩增大鼠DGKγ基因CDS区5'端1029bp和3'端1362bp作为同源重组片段,片段一和片段二之间有24bp重迭序列,设计引物时在片段一上游引物的5'端和片段二下游引物的5'端分别引入15-25bp与线性化载体末端相同的碱基序列;限制性内切酶酶切穿梭质粒使线性化,利用同源重组技术将扩增得到的两个同源重组片段与线性化载体进行定向连接,重组产物转化感受态细胞,用氨苄青霉素筛选阳性单克隆,进行菌液培养;随机选取两个阳性单克隆的菌液,提取质粒进行PCR扩增及扩增产物送测序鉴定,鉴定正确的质粒命名为CMV-rat DGKγ-GFP;将CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒质粒载体与慢病毒包装系统共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以CMV-GFP空载体作为对照;收集慢病毒毒液感染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞中GFP的表达,用嘌呤霉素筛选GFP阳性细胞,收集细胞应用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测细胞中DGKγmRNA和蛋白的表达。结果:1.CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒质粒载体经PCR扩增得到大小为1029 bp和1362bp的片段,产物测序结果与片段一和片段二的序列匹配。2.CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后,48h后荧光显微镜下观察到大部分细胞呈GFP阳性,可见部分细胞发生融合。3.收集的慢病毒感染293T细胞24h后,部分细胞有较强的绿色荧光,呈GFP阳性。4.荧光定量PCR结果显示CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒感染组较空载体组,DGKγmRNA的表达量显着升高(P<0.01)。5.Western Blotting结果显示CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒感染组较空载体组,DGKγ蛋白的表达量极显著升高(P<0.001)。结论:成功构建了大鼠DGKγ慢病毒过表达载体,DGKγ在293T细胞有效高表达。(本文来源于《山西医科大学》期刊2019-05-30）
夏庆,彭明兵,郑志菊,王伟,孙达权[4]（2019）在《Mmp-2重组真核表达载体的构建及MMP-2蛋白对肝癌细胞的作用机制探讨》一文中研究指出目的:构建人基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)基因重组真核表达载体,探讨MMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:以肝癌SMMC-7721细胞为研究模型,以基因重组技术构建pEYFP-Mmp-2重组真核表达载体,p EYFP-Mmp-2一过性转染模型细胞过表达MMP-2-YFP,siRNA转染沉默模型细胞内源性MMP-2表达,设立空白对照、MMP-2沉默对照组、MMP-2沉默组、过表达MMP-2融合蛋白对照组、过表达MMP-2融合蛋白组,划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,钙蛋白酶(calcium-activated neutral protease,Calpain)特异性抑制剂Calpeptin抑制Calpain活性,蛋白印记实验检测MMP-2、MMP-2-YFP、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达变化。结果:成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2。pEYFP-Mmp-2转染过表达MMP-2融合蛋白组细胞高表达MMP-2-YFP。与MMP-2沉默对照组相比,MMP-2沉默组内源性MMP-2表达明显下调(P=0.000),细胞12 h、24 h及48 h迁移率明显降低(P=0.000或P=0.001),48 h侵袭率明显降低(P=0.004),E-cadherin表达明显上调,N-cadherin及Vimentin表达明显下调(P=0.000)。与过表达MMP-2融合蛋白对照组相比,过表达MMP-2融合蛋白组12 h、24 h及48 h迁移率明显增强(P=0.015或P=0.001),48 h侵袭率明显升高(P=0.011),细胞E-cadherin表达明显下调,N-cadherin及Vimentin表达明显上调(P=0.003或P=0.001)。Calpeptin预处理明显降低过表达MMP-2融合蛋白组细胞迁移率和侵袭率(P=0.000),上调E-cadherin,下调N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平(P=0.000)。结论:本实验通过基因重组技术成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2,成功表达MMP-2-YFP融合蛋白;并发现MMP-2通过调节Calpain介导肝癌SMMC-7721细胞迁移、侵袭及EMT。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2019年11期）
夏庆[5]（2019）在《MMP-2重组真核表达载体的构建及其在肝癌SMMC-7721细胞中的作用》一文中研究指出目的:构建人MMP-2重组真核表达载体,观察其表达蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响,并对上述作用机制进行探讨。方法:以肝癌SMMC-7721细胞为研究模型,基因重组技术构建重组真核表达载体pEYFP-MMP-2,质粒转染使模型细胞表达MMP-2融合蛋白(MMP-2-YFP),RNAi抑制模型细胞内源性MMP-2表达,设立空白对照(Control)、MMP-2沉默对照组(siCON)、MMP-2沉默组(siMMP-2)、MMP-2融合蛋白对照组(ovNC)、MMP-2融合蛋白组(ovMMP-2),划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,Calpain特异性抑制剂calpeptin抑制Calpain活性,蛋白印记实验检测MMP-2、MMP-2融合蛋白、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达变化。结果:(1)构建MMP-2真核表达载体pEYFP-MMP-2,并在模型细胞中高表达MMP-2融合蛋白。(2)MMP-2 siRNA显着抑制模型细胞内源性MMP-2表达(p<0.01)。(3)与siCON相比,siMMP-2组12h、24h及48h迁移率明显降低,且48h侵袭率明显降低(p<0.01);与ovNC组相比,ovMMP-2组12h、24h及48h迁移率明显增强,且48h侵袭率明显升高(p<0.05)。(4)与siCON组相比,siMMP-2组E-cadherin蛋白表达明显上调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显下调(p<0.01);与ovNC组相比,ovMMP-2组细胞E-cadherin蛋白表达明显下调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显上调(p<0.01)。(5)Calpeptin处理可以显着降低ovMMP-2组的细胞迁移率和侵袭率(p<0.01)(6)Calpeptin处理明显上调ovMMP-2组细胞内E-cadherin蛋白表达,并下调N-cadherin和Vimentin(p<0.01)蛋白表达。结论:成功构建MMP-2真核表达载体pEYFP-MMP-2,并在肝癌细胞中高表达MMP-2融合蛋白;MMP-2融合蛋白可通过Calpain介导肝癌细胞的迁移、侵袭及EMT。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2019-05-01）
孙威,林建,申欢,彭贵,鞠志刚[6]（2018）在《OjCHS原核表达载体的构建及重组蛋白的纯化》一文中研究指出查尔酮合酶(chalconesynthase,CHS)是类黄酮生物合成过程中的第一个关键酶,也是限速酶,它直接影响并限制类黄酮的合成与积累。在克隆得到日本蛇根草CHS基因(Oj CHS)基础上,将该基因插入原核表达载体pET-28a,完成重组表达质粒pET28a-CHS的构建。随后,利用冻融法将上述质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞中用于重组蛋白的表达。选择不同IPTG浓度、诱导温度及诱导时间对重组菌进行诱导,确定了可溶性重组蛋白的最佳诱导表达条件。最后,通过洗脱、纯化、透析与浓缩完成重组蛋白的纯化。结果显示,成功构建原核表达载体pET28a-CHS,可溶性重组蛋白最佳诱导条件为:IPTG浓度0.45 mmol·L-1,25℃下诱导12 h。最后大量制备并纯化获得符合预期大小的可溶性蛋白,为深入研究Oj CHS的生物学功能奠定了基础。(本文来源于《安徽农业大学学报》期刊2018年06期）
桑圣刚,王梦旖,肖曼,杜冠魁[7]（2018）在《乙型肝炎病毒HBx基因的shRNA重组表达载体的构建和鉴定》一文中研究指出目的:构建pGenesil-3.1-HBx-shRNA重组表达载体,探讨其作用于HepG2.2.15细胞的生物活性.方法:构建了针对HBx基因的siRNA表达载体,通过电穿孔法转染HepG2.2.15细胞,以荧光显微镜观察细胞的转染效率,QRT-PCR检测细胞中HBx基因的相对表达量,利用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测了细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡.结果:酶切和测序鉴定证实构建质粒含有HBx基因,QRT-PCR检测和荧光显微镜观察到构建的pGenesil-3.1-HBx-shRNA可以在HepG2.2.15细胞中表达,HBx基因的表达下降了28%(P<0.05),细胞增殖水平下降了47%(P<0.05),质粒pGenesil-3.1-HBx-shRNA转染后的HepG2.2.15细胞凋亡率显着升高.结论:乙型肝炎病毒HBx基因的shRNA重组表达载体构建成功,沉默HBx基因的shRNA能够抑制HBx基因的表达,且对HepG2.2.15细胞的增殖水平起明显的抑制作用.(本文来源于《中南民族大学学报(自然科学版)》期刊2018年04期）
袁超,孙鑫,吴燕芝,赵佳福,阮涌[8]（2018）在《鸡核转运受体β1蛋白重组真核表达载体的构建与亚细胞定位分析》一文中研究指出引言核转运受体β1(importin β1)蛋白是核输入蛋白家族中的一员,是真核生物中广泛分布的核质转运受体蛋白,其在细胞的基因转录、细胞周期调控以及增殖分化等过程中发挥着重要作用。近年来的研究发现,importin β1可直接介导携带不同类型NLS的靶蛋白进入细胞核,并且这种转运速度要高于importin α/β1共同介导的靶蛋白入核转运。鉴于importin β1蛋白在病毒蛋白细胞核定位以及病毒复制和致病方(本文来源于《中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集》期刊2018-11-21）
张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,贺建宁[9]（2018）在《利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究》一文中研究指出为了构建敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因真核表达载体及单、共转染成纤维细胞后研究两基因表达量之间的变化,以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成c DNA参照Gen Bank中DKK1、BMP4基因序列信息分别设计1对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增获得DKK1、BMP4基因片段、利用So So试剂盒将目的片段连接到pcDNA3. 1真核表达载体上。鉴定正确后的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4单、共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测DKK1、BMP4基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4构建成功,成纤维细胞原代、传代培养良好,转染后细胞生长良好,经实时荧光定量PCR技术和Western Blot检测DKK1基因共转染成纤维细胞较单转染的表达量极显着下降(P <0. 01),BMP4基因的共转染较单转染表达量没有发生明显变化。成功构建了敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因的真核表达载体,并且成功共转染成纤维细胞,DKK1基因的表达量明显下降,BMP4基因的表达量没发生明显变化,因而,推断BMP4基因抑制了DKK1基因的表达,DKK1基因对BMP4基因作用不明显,结果可为进一步研究其功能奠定基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2018年05期）
李艳梅,田政伟,徐丹华,王稳,王小引[10]（2018）在《CHO细胞重组抗体表达载体的构建策略及进展》一文中研究指出近年来,重组蛋白被用来治疗多种不同的疾病,其中重组单克隆抗体是增长最快速的一类生物治疗性重组蛋白。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞是目前最常用的重组抗体生产的宿主细胞。表达载体是重组抗体表达的重要部分,直接影响抗体表达的水平和质量。目前, CHO细胞重组抗体表达载体的构建策略主要有单顺反子表达载体、多启动子表达载体、IRES连接载体、Furin-2A连接载体、抗体融合蛋白等。其中, Furin-2A连接载体由于具有多种优点而逐渐成为表达重组抗体的一种重要策略,尤其是其具有较高的自剪切效率、连接的两个基因表达较为平衡、基因序列短小等优点。该文概括了目前构建CHO细胞重组抗体表达载体的策略、优缺点及其进展。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年11期）
重组表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了构建高效低毒的新型抗菌肽,将抗菌肽Eumenitin及其序列修饰后获得4条新型短肽的毕赤酵母真核表达载体,采用生物信息学方法对Eumenitin及其衍生肽的理化参数进行预测,基因序列经毕赤酵母密码子优化后,克隆至pMD19T-simple载体上,鉴定后连接至毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,构建的重组表达质粒经Avr Ⅱ线性化后,电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,涂布于YPDSZ平板上,进行表型筛选和高拷子筛选,并对5条短肽的溶血率进行测定。结果显示:Eumenitin及其衍生肽均为较稳定的疏水性多肽,空间结构以α螺旋为主,且序列中不含有信号肽。经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,成功构建了5条短肽的毕赤酵母重组表达载体,经设计改造后的抗菌肽溶血性均较低。本研究结果为后续进行重组蛋白的表达以及抑菌活性研究奠定了基础,以期获得抗菌活性强、溶血性低、高表达的新型抗菌肽。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组表达载体论文参考文献
[1].李蕾,谢建山,杜家政,师亮,崔慧林.利用同源重组构建大鼠甘油二酯激酶γ(DGKγ)慢病毒过表达载体[J].中国组织工程研究.2020
[2].尚翠玲,孟佳丽,李昕,王小月,李丹.抗菌肽Eumenitin序列修饰后的毕赤酵母重组表达载体构建[J].畜牧与兽医.2019
[3].李蕾.利用同源重组构建大鼠DGKγ慢病毒过表达载体[D].山西医科大学.2019
[4].夏庆,彭明兵,郑志菊,王伟,孙达权.Mmp-2重组真核表达载体的构建及MMP-2蛋白对肝癌细胞的作用机制探讨[J].重庆医科大学学报.2019
[5].夏庆.MMP-2重组真核表达载体的构建及其在肝癌SMMC-7721细胞中的作用[D].贵州医科大学.2019
[6].孙威,林建,申欢,彭贵,鞠志刚.OjCHS原核表达载体的构建及重组蛋白的纯化[J].安徽农业大学学报.2018
[7].桑圣刚,王梦旖,肖曼,杜冠魁.乙型肝炎病毒HBx基因的shRNA重组表达载体的构建和鉴定[J].中南民族大学学报(自然科学版).2018
[8].袁超,孙鑫,吴燕芝,赵佳福,阮涌.鸡核转运受体β1蛋白重组真核表达载体的构建与亚细胞定位分析[C].中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集.2018
[9].张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,贺建宁.利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究[J].华北农学报.2018
[10].李艳梅,田政伟,徐丹华,王稳,王小引.CHO细胞重组抗体表达载体的构建策略及进展[J].中国细胞生物学学报.2018