多重PCR检测整合子及其在分析金葡菌耐药中的作用

论文摘要

目的：建立多重PCR检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子,分析这三类整合子在介导金黄色葡萄球菌多重耐药中的作用。方法：1)菌株来源：180例金黄色葡萄球菌菌株来自于2009年1月1日至2009年12月31日期间临床送检标本。2)药敏试验：采用K-B法检测金黄色葡萄球菌对20种抗生素的敏感情况。3)使用基因组DNA提取试剂盒和高纯96质粒提取试剂盒分别提取基因组DNA和质粒DNA。4)多重PCR扩增Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子,琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物。结果：1)本研究建立的多重PCR可同时检测出Ⅰ类整合子、Ⅱ类整合子和Ⅲ类整合子。2)药敏结果显示,在检测的20种抗生素中,不同来源的金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、环丙沙星、阿莫西林/棒酸、四环素等具有广泛的耐药性。3)比较细菌质粒DNA和基因组DNA中整合子的检出情况,质粒DNA中Ⅰ类整合子和Ⅱ类整合子阳性率均高于基因组DNA（P<0.05,P<0.05）。4)根据CLSI 2009金黄色葡萄球菌用药选择标准,按照金黄色葡萄球菌所耐抗生素种类不同将菌株分为A、B、C三组：A组为耐青霉素、头孢西丁、苯唑西林的单一耐药菌株；B为耐红霉素、阿奇霉素、复方新诺明、克拉霉素、克林霉素,利奈唑胺的多重耐药菌株；c为耐阿莫西林/棒酸,哌拉西林/他唑巴坦,环丙沙星,四环素,利福平,亚胺培南,头孢唑林,头孢呋辛,左氧氟沙星,庆大霉素的多重耐药菌株。因Ⅲ类整合子只检出1例,不做统计分析,Ⅰ类整合子在三组中的检出率差别有统计学意义（P<0.01）,Ⅰ类整合子检出阳性率C组最高,其次是B组,A组最低；Ⅱ类整合子三组差别无统计学意义（P>0.05）。5)研究痰液、血液、脑脊液、引流物、分泌物、尿液六种标本中耐药金黄色葡萄球菌质粒中整合子检出情况,六类标本中Ⅰ类整合子检出率进行比较,差别显著（P<0.05）,多重耐药比率高的样本分离出的金黄色葡萄球菌,其质粒携带Ⅰ类整合子的比率也高,多重耐药比率低的样本分离出的金黄色葡萄球菌,其质粒携带Ⅰ类整合子的比率低。六类标本中Ⅱ类整合子检出率进行比较,差别无统计学意义（P>0.05）。结论：1)多重PCR是检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子的有效方法,具有节省时间和费用的优点。2)耐药金黄色葡萄球菌质粒中Ⅰ类和Ⅱ类整合子携带率高于基因组DNA,提示金黄色葡萄球菌中质粒是传递整合子的主要载体。3)耐药种类越多的金黄色葡萄球菌Ⅰ类整合子的携带率越高,提示整合子参与介导金黄色葡萄球菌的多重耐药形成。4)多重耐药比率高的样本分离出的金黄色葡萄球菌质粒Ⅰ类整合子的携带率也较高,说明耐药金黄色葡萄球菌所处环境对其携带整合子有影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文缩略词表
• 图表清单
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 综述 细菌耐药及整合子研究进展
• 参考文献
• 个人简介
• 致谢