氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏p27kip1及CTGF表达的调控机制研究

论文摘要

糖尿病肾病（DN）是糖尿病严重微血管并发症,是导致终末期肾病的主要原因。深入研究DN发病机制,寻找有效的防治药物是目前亟待解决的问题。肾小球肥大是DN早期特征性病理改变,与肾小球硬化进展密切相关,但其机制尚未完全阐明。p27kip1是重要细胞周期素激酶抑制剂,在DN肾小球肥大中发挥起作用。CTGF是TGF-β发挥生物学效应的下游因子,参与DN发生发展的多个环节。近年研究发现,他汀类药物对DN具有一定肾脏保护作用,但其确切机制尚不清楚,能否通过抑制p27kip1、CTGF而防止DN肾损伤,目前尚未见报道。本研究利用DM大鼠模型和体外培养肾小球系膜细胞（MC）,应用形态学、免疫组织化学、Western blot、RT-PCR、ELISA等技术,重点研究了DM大鼠模型肾皮质及高糖培养肾小球系膜细胞ERK1/2活性和p27kip1、CTGF、FN和ColⅣ的表达以及氟伐他汀的干预作用。研究结果表明,糖尿病大鼠肾皮质ERK1/2活性及p27kip1、CTGF mRNA及蛋白表达明显增加,ERK1/2及p27kip1、CTGF参与DN肾小球肥大及ECM积聚。高糖培养大鼠系膜细胞ERK1/2活性及p27kip1、CTGF表达明显增高,系膜细胞内总蛋白及FN含量明显增高。氟伐他汀可延缓并减轻DM大鼠尿白蛋白排泄,减轻肾小球肥大、抑制糖尿病大鼠肾皮质及系膜细胞ERK1/2活性及p27kip1、CTGF、FN和ColⅣ的异常表达,并降低系膜细胞总蛋白及FN含量。氟伐他汀可能通过抑制ERK1/2活性下调p27kip1、CTGF转录和蛋白表达,而减轻肾小球肥大和细胞外基质积聚,从而延缓DN进展。这些研究结果为临床上合理应用他汀类药物保护肾脏、防治DN提供实验依据。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词表
• 文献综述
• 一、细胞周期与糖尿病肾病
• 1. 细胞生长与细胞周期
• 2. 细胞周期与细胞周期调节蛋白
• kip1'>3. 细胞周期负调控蛋白p27^kip1
• kip1 与糖尿病肾病'>4. p2^kip1与糖尿病肾病
• 二、CTGF 与糖尿病肾病
• 1. CTGF 的生物学性质与生理功能
• 2. CTGF 与DN 肾小球病变
• 3. CTGF 与DN 肾小管间质损伤
• 三、他汀类药物的肾脏保护作用
• 1. 抑制系膜细胞增殖，诱导细胞凋亡
• 2. 减少细胞外基质积聚，延缓DN 进展
• 3. 抗炎和保护内皮细胞
• 4. 免疫调节作用
• 5. 改善肾脏血液动力学
• 6. 对抗糖尿病肾病氧化损伤
• 前言
• 材料与方法
• 一、实验材料
• （一） 实验动物
• （二） 主要试剂
• （三） 主要仪器
• （四） 主要试剂配制
• 二、实验方法
• （一） 体内实验
• 1. 动物分组及模型复制
• 2. 标本收集
• 3. 观察指标及检测方法
• （二） 体外实验
• 1. 肾小球分离
• 2. 肾小球系膜细胞培养
• 3. 实验分组
• kip1、CTGF表达和ERK1/2活性'>4. Western blot检测系膜细胞p27^kip1、CTGF表达和ERK1/2活性
• kip1、CTGF mRNA表达'>5. RT-PCR检测系膜细胞p27^kip1、CTGF mRNA表达
• 6. 系膜细胞总蛋白含量测定
• 7. ELISA检测系膜细胞培养上清FN浓度
• 三、统计学分析
• 结果
• 一、体内实验
• （一） 一般情况及生存情况
• （二） 尿白蛋白排泄率的比较
• （三） 氟伐他汀对大鼠肝功能、血脂和血糖的影响
• （四） 氟伐他汀对大鼠肾功能、血白蛋白含量的影响
• （五） 氟伐他汀对大鼠肾重、体重及肾脏肥大指数的影响
• （六） 氟伐他汀对大鼠肾小球体积的影响
• kip1蛋白及mRNA 表达的影响'>（七） 氟伐他汀对肾皮质p27^kip1蛋白及mRNA 表达的影响
• （八） 氟伐他汀对肾皮质CTGF 蛋白及mRNA 表达的影响
• （九） 氟伐他汀对肾皮质ERK1/2 蛋白活性的影响
• （十） 各组大鼠肾小球形态学改变
• （十一） 各组大鼠肾小球免疫组织化学检测
• 二、体外实验
• kip1、CTGF蛋白表达的影响'>（一） 高糖对系膜细胞ERK1/2活性及p27^kip1、CTGF蛋白表达的影响
• （二） 氟伐他汀对高糖诱导系膜细胞p-ERK1/2活性的影响
• kip1蛋白及mRNA 表达的影响'>（三） 氟伐他汀对高糖诱导系膜细胞p27^kip1蛋白及mRNA 表达的影响
• （四） 氟伐他汀对高糖诱导系膜细胞CTGF 蛋白及mRNA 表达的影响
• （五） 氟伐他汀对高糖诱导系膜细胞总蛋白含量的影响
• （六） 氟伐他汀对高糖诱导系膜细胞纤连蛋白的影响
• 讨论
• kip1表达增加与糖尿病肾病肾小球肥大'>一、p27^kip1表达增加与糖尿病肾病肾小球肥大
• 二、CTGF 与糖尿病肾病细胞外基质积聚
• kip1及CTGF 的表达'>三、ERK1/2 信号介导高糖刺激肾系膜细胞p27 ^kip1及CTGF 的表达
• kip1及CTGF 的表达的影响'>四、氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏及系膜细胞ERK1/2活性、p27^kip1及CTGF 的表达的影响
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读博士期间发表的学术论文
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢