昆明狼犬精液冷冻试验研究

论文摘要

以昆明狼犬为对象,作了梯度离心法去除精清对犬精液冷冻效果的影响;精液稀释液配方的筛选及优化;精液平衡方法研究;冷冻剂型及冷冻方法的研究;冷冻精液解冻方法的研究;冷冻精液人工授精等试验。结果表明:1、梯度离心法去除精清对犬精液冷冻效果的影响。对5只昆明狼犬新鲜精液进行不离心（对照组）、1000r/min、1500r/min、2000r/min、2500r/min、3000r/min、3500r/min、4000r/min离心去除精清处理,并用筛选出的Ⅰ号稀释液代替精清,反复冲洗后行超低温冷冻,解冻后检测精子的活率结果证明:1500r/min离心组活率达43.5±2.43,但与2000r/min组差异不显著（P＞0.05）,二者与其它组差异均较明显（P＜0.05）。1500r/min组精子的顶体完整率优于其它各组（P＜0.05）、精子畸形率最低（24.5±1.87）、生存指数最高（28.2±1.24）、解冻后4℃条件下精子存活时间可达96h,优于其它各组（P＜0.05）。2、精液稀释液配方的筛选及优化。用筛选出的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组稀释液分别制作颗粒冻精,解冻后测得结果表明:Ⅰ组的冻后平均活率优于Ⅱ、Ⅲ组,但Ⅰ、Ⅱ组之间差异不显著（P＞0.05）,均与Ⅲ组差异显著（P＜0.05）;顶体完整率和畸形率,Ⅰ组均优于Ⅱ、Ⅲ组（P＜0.05）。稀释液优化过程中发现Ⅰ组中分别添加一定量的VB12、COVB和VC不但均能够提高冷冻-解冻精子的活率,对顶体有保护作用,而且可降低精子的畸形率,但与对照组差异不显著（P＞0.05）。3.、精液平衡方法研究。精液稀释后用16层纱布、8层纱布包被平衡法和100ml、200ml、300ml体积梯度水浴平衡法进行比较,结果表明:16层纱布包裹放入4℃冰箱内平衡3.5～4.0h后再超低温冷冻,解冻后精子平均活率（43.23%）、生存指数（27.22±2.45）和顶体完整率（77.59%）与200ml水浴组接近（P＞0.05）,与其它组差异显著（P＜0.05）。4、精液冷冻剂型及冷冻方法的研究。试验用炸熏法颗粒、液氮铝饭盒法颗粒、细管炸熏法及安瓶炸熏法四种冷冻剂型对精液冷冻-解冻后比较结果表明:炸熏法制作的颗粒冻精活率为43.48±2.07,明显优于液氮铝饭盒法颗粒、细管和安瓶法（P＜0.05）。用程序冷控法按照程序Ⅰ、程序Ⅱ、程序Ⅲ制作细管冻精,解冻后测得精子活率结果证明:程序Ⅰ（32.08±3.16）优于程序Ⅱ（25.26±0.92）和程序Ⅲ（14.57±2.09）（P＜0.05）。炸熏法颗粒优于程序Ⅰ法（P＜0.05）。5、冷冻精液解冻方法的研究。用干解冻和湿解冻法解冻颗粒冻精的结果表明:50～55℃水浴条件下干解冻法解冻精子的平均活率（42.30%）高于湿解冻法（P＞0.05）;测得精子顶体完整率的结果显示:干解冻法（67.01±2.20）明显优于湿解冻法（p＜0.05）,但前者的精子畸形率显著高于后者（p＜0.05）。6、冷冻精液人工授精。将10只母犬随机分成冷冻精液组（6只）和鲜精组（4只）,用同一公犬精液做供试精液,均适时子宫内输精三次,间隔时间24h,结果表明:冷冻精液受胎率为50.00%,鲜精受胎率为75.00%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略符号
• 第一部分 文献综述
• 1 犬精液冷冻保存技术进展
• 2 精液采集及品质的评定方法研究进展
• 2.1 精液的采集
• 2.1.1 阴茎按摩法
• 2.1.2 母犬诱情法
• 2.1.3 假阴道法
• 2.1.4 综合采精法
• 2.2 精液品质的评定方法研究进展
• 2.2.1 精液品质评定的意义
• 2.2.2 动物精液品质常规评定方法
• 2.3 动物精液品质评定方法
• 2.3.1 质膜的完整性
• +内流'>2.3.2 精子获能和Ca⁺内流
• 2.3.3 顶体状态
• 2.3.4 受精能力检侧
• 2.4 动物精液品质评定方法展望
• 3 精液的稀释
• 3.1 防冻剂
• 3.1.1 甘油
• 3.1.2 卵黄（EYC）
• 3.1.3 其它低温防冻剂
• 3.2 营养剂
• 3.2.1 奶
• 3.2.2 糖
• 3.3 缓冲剂及其它添加物
• 3.4 稀释液配方
• 3.5 精液的稀释方法
• 4 精液冷冻
• 4.1 精液的平衡
• 4.2 精液冷冻
• 4.2.1 颗粒精液
• 4.2.2 安瓶精液
• 4.2.3 细管精液
• 4.3 精液的解冻
• 5 人工授精（AI）
• 5.1 人工授精（AI）的生产实践意义及其概况
• 5.2 犬冷冻精液人工授精（AI）研究进展
• 5.2.1 犬冷冻精液人工授精（AI）概况
• 5.2.2 影响犬冷冻精液人工授精受胎率的因素
• 第二部分 试验研究
• 1 试验材料
• 1.1 试验动物
• 1.2 试剂和仪器
• 1.2.1 试验用试剂
• 1.2.2 试验器械
• 1.3 试验地点
• 1.4 试验动物处理
• 2 试验方法
• 2.1 精液的采集
• 2.1.1 阴茎按摩法
• 2.1.2 母犬诱情法
• 2.1.3 假阴道法
• 2.1.4 综合采精法
• 2.2 精液品质的常规检查
• 2.2.1 射精量
• 2.2.2 pH值
• 2.2.3 活率
• 2.2.4 密度
• 2.2.5 顶体完整率
• 2.2.6 存活时间
• 2.2.7 生存指数
• 2.3 精液的稀释
• 2.4 精液的降温与平衡
• 2.5 冷冻精液的制作
• 2.5.1 炸熏法制作犬颗粒冻精和安瓶冻精
• 2.5.2 液氮铝饭盒冷冻法制作犬颗粒冻精
• 2.5.3 程序降温法制作犬细管冻精
• 2.6 精液的解冻
• 2.7 试验设计
• 2.8 统计分析
• 3 试验结果
• 3.1 梯度离心法去精清对犬精液冷冻效果的影响
• 3.1.1 采精方法研究
• 3.1.2 精液品质的评定
• 3.1.3 精液离心方法研究
• 3.2 精液稀释液配方的筛选及优化
• 3.2.1 精液稀释液配方的筛选
• B12的冷冻效果'>3.2.2 稀释液中添加V_B12的冷冻效果
• B对冷冻效果的影响'>3.2.3 稀释液中添加复合V_B对冷冻效果的影响
• C对冷冻效果的影响'>3.2.4 稀释液中添加V_C对冷冻效果的影响
• 3.3 犬精液平衡方法研究
• 3.4 不同冷冻剂型及冷冻方法的研究
• 3.4.1 不同冷冻剂型对精子冻后的影响
• 3.4.2 炸熏法与液氮铝饭盒法法对犬颗粒精液的影响
• 3.4.3 程序冷控法
• 3.5 昆明狼犬冷冻精液解冻方法的研究
• 3.5.1 不同解冻方法对精子冻后的影响
• 3.5.2 不同解冻方法解冻后精子在不同条件下存活时间比较
• 3.6 昆明狼犬冷冻精液人工授精试验
• 4 分析与讨论
• 4.1 梯度离心法去精清对犬精液冷冻效果的影响
• 4.2 精液稀释液配方的筛选及优化
• 4.3 犬精液平衡方法研究
• 4.4 不同冷冻剂型及冷冻方法的研究
• 4.5 昆明狼犬冷冻精液解冻方法的研究
• 4.6 昆明狼犬冷冻精液人工授精（AI）试验
• 5.结论
• 参考文献
• 致谢
• 附图: