蒲公英提取物对LPS所致小鼠急性肺损伤的保护作用研究

论文摘要

研究蒲公英提取物对脂多糖（LPS）所致小鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用,并在细胞因子及分子水平探讨其对ALI的保护作用机理,为临床急性肺炎等疾病的防治提供依据,同时为蒲公英作为先导药物进一步有效开发和利用奠定基础。本研究采用水提法制备蒲公英提取物,LPS滴鼻建立小鼠ALI模型,设空白组、模型组、蒲公英剂量（2.5、5、10mg/kg）组和地塞米松（0.5mg/kg）组。观察小鼠肺组织病理变化,测定肺组织中髓过氧化物酶（MPO）含量及肺湿／干重比（W/D）,检测肺泡支气管灌洗液（BALF）中炎性相关细胞数目及炎性蛋白含量,采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、前列腺素E2 （PGE2）及Griess试剂法测定一氧化氮（NO）的分泌,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测肺组织中iNOS和COX-2的mRNA表达,免疫印迹（Western blotting）法检测核转录因子kappa B（NF-κB）蛋白的表达。结果：应用LPS滴鼻建立的ALI小鼠模型,通过观察并与空白组比较,小鼠肺部病变较明显,具有ALI小鼠主要特征,说明模型建立较成功。蒲公英提取物各剂量组与模型组比较不同程度的减轻了ALI小鼠肺组织病变,肺组织中MPO含量减少,差异极显著（P<0.01）,W/D、炎性细胞数目和蛋白含量明显降低,差异显著或极显著（P<0.05或P<0.01）,明显抑制BALF中TNF-α、IL-6、PGE2、NO的分泌,差异显著或极显著（P<0.05或P<0.01）,抑制ALI小鼠肺组织中iNOS、COX-2 mRNA及NF-κB蛋白的表达,差异显著或极显著（P<0.05或P<0.01）。结论：蒲公英提取物通过抑制ALI小鼠肺组织中NF-κB （p65）蛋白表达,减弱ALI小鼠肺组织损伤程度,改善水肿程度,减少MPO分泌,抑制炎性蛋白及细胞释放和TNF-α、IL-6、NO、PGE2分泌,降低iNOS和COX-2 mRNA表达,从而对ALI小鼠起到一定保护作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 急性肺损伤（ALI）概述
• 2 ALI的发病作用机制
• 2.1 中性粒细胞在ALI发病过程中的作用
• 2.2 炎症因子、炎症介质及核转录因子在ALI中的作用
• 3 ALI的治疗
• 4 蒲公英研究进展
• 5 本课题的研究目的和意义
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 试验动物
• 1.2 试验药物
• 1.3 试验试剂
• 1.4 试验仪器
• 2 方法
• 2.1 蒲公英提取物的制备
• 2.2 试验分组与给药
• 2.3 ALI模型的建立
• 2.4 肺病理组织学检查
• 2.5 肺湿/干重比（W/D）
• 2.6 MPO含量测定
• 2.7 支气管肺泡灌洗液（BALF）的制备
• 2.8 炎性细胞总量计数和分类计数
• 2.9 BALF中蛋白的测定
• 2.10 细胞因子TNF-α和IL-6含量测定
• 2.11 炎症介质PGE2和NO含量的测定
• 2.12 RT-PCR法测定ALI小鼠肺组织中iNOS和COX-2 mRNA的表达
• 2.13 Western blotting法检测ALI小鼠肺组织中NF-κB（p65）蛋白的表达
• 2.14 数据处理
• 结果
• 3.1 蒲公英提取物对ALI小鼠肺组织病理变化的影响
• 3.2 蒲公英提取物对ALI小鼠肺组织中MPO含量的影响
• 3.3 蒲公英提取物对ALI小鼠肺W/D的影响
• 3.4 蒲公英提取物对ALI小鼠BALF中蛋白含量的影响
• 3.5 蒲公英提取物对ALI小鼠BALF中细胞总数及主要炎症细胞数目的影响
• 3.6 蒲公英提取物对ALI小鼠BALF中TNF-α-和IL-6含量的影响
• 3.7 蒲公英提取物对ALI小鼠BALF中NO和PGE2含量的影响
• 3.8 总RNA电泳结果
• 3.9 蒲公英提取物对ALI小鼠肺组织中iNOS和COX-2 mRNA表达的影响
• 3.10 SDS—PAGE电泳试验结果
• 3.11 蒲公英提取物对ALI小鼠肺组织中NF-κB（p65）蛋白表达的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 附录（攻读学位期间发表论文目录）