替比夫定对HepG2肿瘤干细胞标记分子CD133、AFP的影响及其生物学意义的研究

论文摘要

目的：探讨替比夫定对肝癌细胞株HepG2细胞肿瘤干细胞标志分子CD133和甲胎蛋白（AFP）的影响，以发现核苷类药物治疗肝癌患者的分子生物学机制，为肝癌的综合治疗提供新的实验数据和理论根据。方法：本研究以HepG2细胞为实验细胞，实验分为两组：实验组（替比夫定组）和对照组。细胞培养至细胞80%铺满培养瓶时，实验组给予含替比夫定（10umol/L）的细胞培养液培养，对照组仅给予细胞培养液培养。隔天更换细胞培养液。继续培养细胞9天，收集细胞。1)1×107细胞/ml被用于流式细胞仪双染法检测HepG2细胞表面CD133的表达：2)1×107细胞/ml被用于化学发光免疫检测细胞内AFP含量;3)1×107细胞/ml被用于实时荧光定量聚合酶链反应（Real-Time PCR）检测细胞内CD133和AFP的表达。结果：1.流式细胞仪检测显示，替比夫定组和对照组的CD133阳性细胞的表达率分别为1.9%±0.04和0.83%±0.02，经统计学卡方检验，两组间存在显著性差异（P<0.05），提示替比夫定处理使HepG2细胞表面肿瘤干细胞标志分子CD133表达减少。2. Real-time PCR检测，替比夫定组和对照组HepG2细胞CD133mRNA的表达分别为0.609士0.057、0.956士0.132，经统计学t检验，两组间存在明显差别（P<0.05）。3.两组细胞在6孔培养板上培养3天后，取细胞裂解液，采用化学发光免疫分析法，测得两组细胞内AFP的数值分别为：180.32士3.92、149.07士3.57，t检验显示，两组间HepG2细胞内AFP的表达差异显著，有统计学意义，P<0.05。4.两组细胞培养9天后，同样细胞数的细胞获取总RNA，分别取20ng/ul RNA用于Real-time PCR检测，替比夫定组和对照组AFP表达分别为1.061士0.034、2.507士1.379，t检验显示，两组间有统计学意义的差异，P<0.05。结论：替比夫定干预HepG2细胞能抑制细胞肿瘤干细胞标志分子CD133的表达，降低AFP合成，这可能是应用核苷类药物治疗肝炎，延缓肝癌发生的分子生物学机制之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 文献综述
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 英文缩写
• 攻读学位期间发表的论文