论文摘要
目的:本研究旨在研究mcl-1特异性siRNA转染人类肝癌细胞HepG2,对HepG2细胞mcl-1 mRNA水平及Mcl-1蛋白表达水平的影响,及其对体外培养HepG2细胞增殖、凋亡的影响。初步探讨mcl-1在肝癌凋亡中的作用。方法:1通过计数法测定HepG2细胞的生长曲线,获得该细胞系基本生长特性。2将mcl-1特异性siRNA经脂质体介导转染人肝癌细胞HepG2;半定量RT-PCR观察转染前后mcl-1 mRNA水平变化,比较对应不同位点的两对siRNA片段对mcl-1的干扰效果,分析RNA干扰的特异性、时效性;Western blot检测转染前后Mcl-1蛋白表达情况。3绘制转染mcl-1特异性siRNA前后HepG2细胞生长曲线,检测转染mcl-1特异性siRNA对HepG2细胞增殖的影响;Annexin V/PI双标记染色检测转染mcl-1特异性siRNA对HepG2细胞凋亡的影响。结果:1通过细胞计数法绘出HepG2细胞的生长曲线。2 mcl-1特异性siRNA片段能有效降低mcl-1 mRNA水平,最大干扰效率达（67.25±4.47）%,高于作为对照的非相关片段（P<0.05）;针对不同位点的两对siRNA片段（siRNA-F1、siRNA-F2）对mcl-1均可产生干扰作用,彼此间差别不大;干扰作用于转染后24h即可出现,48h达高峰,72h稍有降低;Western blot证明转染siRNA-F1后Mcl-1蛋白表达显著下调（P<0.05）。3转染mcl-1特异性siRNA-F1的HepG2细胞增殖受到抑制;Annexin V/PI双标记染色检测发现与对照组相比,转染siRNA-F1 48h后,HepG2细胞中凋亡细胞所占比例显著增高（P<0.01）。结论1 mcl-1特异性siRNA可有效下调肝癌细胞HepG2中mcl-1 mRNA水平Mcl-1蛋白表达。2 mcl-1特异性siRNA下调肝癌细胞HepG2中Mcl-1蛋白表达后,HepG2细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加,表明Mcl-1在体外培养的肝癌细胞HepG2中发挥抗凋亡作用。