HSF1在严重烧伤炎症反应中调控HMGB1和IL-10表达分子机制的研究

论文摘要

热休克因子1（heat shock factor1,HSF1）是最早被发现的热休克转录因子。在各种应激反应,特别是热休克反应时调控HSPs（heat shockproteins,HSPs）的诱导表达中发挥重要作用。目的:本研究以RAW264.7细胞系为研究对象,以烧伤血清刺激建立烧伤细胞模型,在体外研究HSF1与HMGB1（high mobility groupbox）和IL-10（Interleukin-10）启动子区HSE（heat shock element）相互作用产生的抗炎症机制。方法:Western blot法检测烧伤血清刺激后的RAW264.7细胞与正常对照组中HSF1与NF-κB表达量,应用凝胶阻滞（EMSA）法检测HSF1与炎症因子HMGB1和抗炎症因子IL-10启动子区相互作用,同时探索NF-κB是否参与上述HSF1—HSE的相互作用。结果:（1）发现正常培养条件下的RAW264.7细胞几乎不表达HSF1少量表达NF-κB,而加入烧伤血清刺激后的细胞能够明显稳定表达HSF1同时大量表达NF-κB;（2）结果显示HSF1与HMGB1和IL-10的启动子区HSE有相互作用;（3）凝胶超阻滞法检测发现NF-κB并不参HSF1与HMGB1和IL-10启动子区HSE的结合。结论:（1）烧伤血清刺激细胞后可诱导细胞发生自身保护反应,大量表达HSF1蛋白,通过一系列细胞信号通路抑制炎症反应的发生,也证明体外烧伤模型构建成功,同时NF-κB处理前后表达差异明显表明其快速介导炎症反应;（2）HSF1与HMGB1和IL-10的启动子区HSE结合,抑制HMGB1的表达的同时促进IL-10的表达,负反馈调节炎症反应;（3）凝胶超阻滞法检测发现NF-κB并不参与HMGB1和IL-10启动子区HSF1与HSE的结合,因此可以推断在炎症反应中HMGB1和IL-10的表达并不直接受NF-κB的调节。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 前言
• 实验流程图
• 第一章 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验试剂
• 1.3 实验仪器
• 1.4 实验方法
• 第二章 实验结果
• 2.1 RAW264.7细胞的培养结果
• 2.2 Bradford法测定蛋白质浓度
• 2.3 Western Blot法检测HSF1和NF-κB在RAW264.7细胞核中的表达
• 2.4 凝胶阻滞法检测HSF1与HMGB1和IL-10启动子区HSE是否结合
• 2.5 凝胶超阻滞法检测NF-κB是否参与HSFI-HSE的结合
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间的主要成果