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一株蜀柏毒蛾无芽孢杆菌病原的生理生化特性与应用研究

2020-12-04阅读(574)

一株蜀柏毒蛾无芽孢杆菌病原的生理生化特性与应用研究

论文摘要

从蜀柏毒蛾爆发种群中发现大量虫体萎缩、体色变红的感病现象，经采集、分离得到一株病原菌，其纯培养物的致病性被科赫原理证明。本文以这株病原菌为研究对象，对该菌株进行了生理生化特性研究、对蜀柏毒蛾2龄幼虫的室内毒力和林间防治效果以及对2龄家蚕的室内安全性研究，主要结果如下：1、经生理生化测定和16S rDNA扩增序列同源性分析和系统发育分析表明：该病原菌与缺陷假单胞菌（Brevundimonas bullata）的保守序列有100％同源性，因此确定该病原菌为缺陷假单胞菌（Brevundimonas bullata）。2、通过口服感染测定了该病原菌对蜀柏毒蛾2龄幼虫的室内毒力，毒力回归方程为Y=-9．7851+6．667X，致死中浓度LC50=9．28×108cfu／mL,并且对感染幼虫具有明显的抑食作用，经处理的未死幼虫在粪便累积重量、平均体长、平均体重、羽化率、平均怀卵量和卵的孵化率方面都明显低于对照组幼虫。3、通过口服感染测定了缺陷假单胞菌+PoNPV(LC50)和缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲对蜀柏毒蛾2龄幼虫的室内毒力，毒力回归方程为Y=29．2255+6．205X和Y=27．6977+5．491X；致死中浓度LC50=2．23×103cfu／mL和LC50=1．15×104cfu／mL：灭幼脲增效比值SR为162609，而在缺陷假单胞菌中加入PoNPV(LC50)后对2龄蜀柏毒蛾幼虫具有显著的叠加增效作用。用缺陷假单胞菌、缺陷假单胞菌+PoNPV(LC50)、缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲等9种处理对林间越冬代蜀柏毒蛾2-3龄幼虫进行喷雾防治，结果表明在缺陷假单胞菌浓度相同的情况下，加入1mg/L灭幼脲和PoNPV(LC50)后虫口死亡率显著升高，不同处理间呈现显著差异，表现出明显的增效作用。4、通过口服感染测定了缺陷假单胞菌、缺陷假单胞菌+PoNPV(LC50)和缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲对家蚕2龄幼虫的室内毒力。结果表明3种处理对家蚕均无毒力作用，并且经处理后的幼虫在平均身体长度、平均体重、羽化率、平均怀卵量和粪便累积重量等方面都与对照组幼虫没有明显差异。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 1 文献综述
  • 1.1 柏木林在森林生态中的地位与作用
  • 1.2 蜀柏毒蛾的分布与危害
  • 1.3 蜀柏毒蛾的生物学特性
  • 1.3.1 卵期
  • 1.3.2 幼虫期
  • 1.3.3 食性
  • 1.3.4 蛹期
  • 1.3.5 成虫期
  • 1.4 蜀柏毒蛾的发生危害与外界环境关
  • 1.5 蜀柏毒蛾主要防治方法与效果评价
  • 1.5.1 蜀柏毒蛾化学防治
  • 1.5.2 蜀柏毒蛾生物防治
  • 1.5.3 人工防治与物理防治
  • 1.6 本研究的目的和意义
  • 2 实验材料
  • 2.1 供试菌株
  • 2.2 供试虫源
  • 2.3 主要仪器
  • 2.4 主要染色液
  • 2.5 主要药品
  • 2.6 主要培养基
  • 3 实验方法
  • 3.1 病原菌的分离纯化
  • 3.2 病原菌回接试验
  • 3.3 病原菌形态观察
  • 3.4 革兰氏染色
  • 3.5 芽孢染色
  • 3.6 病原菌生理生化特征测定
  • 3.6.1 淀粉水解试验
  • 3.6.2 接触酶试验
  • 3.6.3 氧化酶试验
  • 3.6.4 柠檬酸盐利用试验
  • 3.6.5 吲哚（靛基质）试验
  • 3.6.6 V-P试验
  • 3.6.7 硫化氢试验
  • 3.6.8 水解明胶（蛋白）试验
  • 3.6.9 卵磷脂酶试验
  • 3.7 病原菌16S rDNA基因序列测定
  • 3.7.1 病原菌基因组DNA提取
  • 3.7.2 病原菌16S rDNA的PCR扩增
  • 3.8 病原菌室内毒力测定
  • 3.8.1 病原菌浓度测定
  • 3.8.2 病原菌对2龄蜀柏毒蛾幼虫的室内毒力测定
  • 3.9 PoNPV纯化试验
  • 50)筛选'>3.10 灭幼脲增效浓度筛选和PoNPV致死中浓度(LC50)筛选
  • 50)和病原菌+1mg/L灭幼脲对2龄蜀柏毒蛾幼虫的室内毒力测定'>3.11 病原菌+PoNPV(LC50)和病原菌+1mg/L灭幼脲对2龄蜀柏毒蛾幼虫的室内毒力测定
  • 50)、病原菌+1mg/L灭幼脲对林间2-3龄幼虫的防治试验'>3.12 病原菌、病原菌+PoNPV(LC50)、病原菌+1mg/L灭幼脲对林间2-3龄幼虫的防治试验
  • 50)、病原菌+1mg/L灭幼脲对家蚕毒力测定'>3.13 病原菌、病原菌+PoNPV(LC50)、病原菌+1mg/L灭幼脲对家蚕毒力测定
  • 4 数据处理
  • 5 结果与分析
  • 5.1 病原菌回接试验
  • 5.2 病原菌形态特征
  • 5.3 病原菌生理生化特征
  • 5.4 病原菌16S rDNA的PCR扩增序列的同源性分析利系统发育分析
  • 5.4.1 病原菌基因组DNA检测
  • 5.4.2 病原菌16S rDNA的PCR扩增序列同源性分析和的系统发育分析
  • 5.5 缺陷假单胞菌室内毒力测定
  • 50)筛选'>5.6 灭幼脲增效浓度筛选和PoNPV致死中浓度(LC50)筛选
  • 50)和缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲对2龄蜀柏毒蛾幼虫的室内毒力测定'>5.7 缺陷假单胞菌+PoNPV(LC50)和缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲对2龄蜀柏毒蛾幼虫的室内毒力测定
  • 50)、缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲对林间2-3龄幼虫的防治试验'>5.8 缺陷假单胞菌、缺陷假单胞菌+PoNPV(LC50)、缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲对林间2-3龄幼虫的防治试验
  • 50)、缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲对家蚕室内毒力测定'>5.9 缺陷假单胞菌、缺陷假单胞菌+PoNPV(LC50)、缺陷假单胞菌+1mg/L灭幼脲对家蚕室内毒力测定
  • 6 结论
  • 7 讨论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 作者简介

    • 相关论文文献

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