垂体腺瘤的蛋白质组学研究

论文摘要

第一部分垂体腺瘤组织的差异蛋白质组学研究目的研究分析垂体腺瘤组织与正常垂体组织的差异蛋白质表达情况,为探讨肿瘤发病机制,并为发现可供临床应用的诊断标记物及药物作用靶点提供线索和依据。方法收集复旦大学附属华山医院神经外科2006年9月至2007年9月手术切除并经术后病理证实的PRL型,GH型,无功能型垂体腺瘤标本各5例及正常垂体组织3例进行混合样品的蛋白质组学研究。经提取组织全蛋白质、双向凝胶电泳（2-DE）、快速银染、差异蛋白质点的选取及质控、切胶及蛋白质酶解、基质辅助激光解吸离子飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定后获得在垂体腺瘤及正常垂体组织中的差异表达蛋白质。结果分别建立了3种类型的垂体腺瘤组与正常垂体对照组样品各自的分辨率及重复性较好的混合标本2-DE图谱,以分子量（MW）15-75kDa及等电点（PI）4-8范围内的蛋白质点分布最多,提示垂体腺瘤与垂体组织的同源性。经软件分析及质控措施后,确定PRL、GH、无功能型垂体腺瘤与正常垂体的有效差异蛋白质点分别为111、70、75个,所有有效的差异蛋白质点在全部12张图谱上经MALDI-TOF-MS质谱分析、内校正、检索MASCOT数据库及生物信息学分析后,分别鉴定出35、21、24个蛋白质,其中包括SOD1、CA1、ESD、PRL、GH在内的有效差异蛋白质点。结论成功建立垂体腺瘤与正常垂体组织的2-DE图谱。发现CA1、ESD、PGK1、PARK7等与垂体腺瘤发病密切相关的重要蛋白质,其中CA1可能是一个重要的抑癌因子,ESD则可能有重要的临床应用潜质。证明垂体腺瘤发病是一个多因素、多步骤参与的复杂过程。第二部分应用2D-HPLC串联LTQ-Orbitrap ESI MS技术对正常垂体组织蛋白表达谱的研究目的建立正常人垂体组织蛋白表达谱。方法应用最新的二维高效液相色谱（2D-HPLC）串联多级线性离子阱和静电场轨道阱电喷雾电离质谱（LTQ-Orbitrap ESI MS）技术分析正常垂体组织,并用鸟枪法（shotgun）技术进行蛋白定量,建立正常垂体的全蛋白质表达谱数据库。结果首次建立了含406个点的正常垂体组织的定量的全蛋白质数据库,并对其进行了分类。与结合、黏合作用有关的蛋白所占的比例最高（41%）,其次是有催化活性的蛋白（28%）,其中含量较高的重要蛋白质有4型胶原蛋白、催乳素、生长激素、微管蛋白等。结论运用最新的蛋白质组学技术可高效、准确、全面的建立垂体组织的全蛋白表达谱,它填补了蛋白质组学在垂体方面的研究空白,也为进一步研究垂体瘤的发病机制奠定基础。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 垂体腺瘤组织的差异蛋白质组学研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 应用HPLC串联LTQ-Orbitrap MS对正常垂体组织蛋白表达谱的研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 全文结论与展望
• 文献综述
• 致谢