论文摘要
目的本研究通过脂多糖（LPS）刺激小鼠腹腔巨噬细胞的炎症模型,观察一氧化氮（NO）、炎性细胞因子TNF-α、IL-6、金属蛋白酶-9（MMP-9）和NF-κB的含量与表达,探讨丹酚酸A（SAA）对炎性损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法分离纯化小鼠腹腔巨噬细胞后,随机分为五组。对照组;LPS刺激组（10μg/ml LPS刺激）;高、中、低浓度药物组（10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml三种浓度丹酚酸A + 10μg/ml LPS）。分别进行以下实验:用Griess法测定巨噬细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量;放射免疫法测定上清液中白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;用明胶酶谱法测定上清液中金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达;用免疫印迹（Western-blot）法测定细胞胞浆和胞核中一氧化氮合酶（iNOS）和NF-κB（P65）的表达。结果1.与对照组相比,LPS刺激巨噬细胞后,释放的NO、IL-6和TNF-α含量明显增高（P<0.01）,高、中、低（10μg/ml,1μg/ml,0.1μg/ml）浓度的SAA与LPS刺激的巨噬细胞共同孵育后,对巨噬细胞释放的NO、IL-6和TNF-α具有明显的抑制作用（P<0.01）,且呈剂量依赖性。2.与对照组相比, LPS刺激巨噬细胞后,细胞胞浆内的iNOS和MMP-9表达明显增高（P<0.01）,高、中、低浓度的SAA与LPS刺激的巨噬细胞共同孵育后,对巨噬细胞胞浆内的iNOS和MMP-9具有明显的抑制作用（P<0.01）,且呈剂量依赖性。3.与对照组相比,LPS刺激巨噬细胞后,细胞胞核内的NF-κB（P65）表达明显增高（P<0.01）,高浓度的SAA与LPS刺激的巨噬细胞共同孵育后,对巨噬细胞胞核内的NF-κB（P65）具有明显的抑制作用（P<0.01）。结论1.小鼠腹腔巨噬细胞经LPS刺激后,可引起明显的炎性损伤,表现为NO、iNOS、炎性细胞因子IL-6和TNF-α含量与对照组相比显著增高。2.用丹酚酸A预处理后,可有效的减少巨噬细胞炎性损伤的程度,表现为NO、iNOS、IL-6和TNF-α含量与LPS刺激组相比明显降低,说明丹酚酸A通过减少这些炎症因子的释放来抑制LPS诱导的炎症损伤。3.巨噬细胞经LPS刺激后,NF-κB的活性显著升高,用丹酚酸A预处理后NF-κB的活性降低,说明丹酚酸A通过抑制NF-κB的活性来发挥其抗炎的作用,并且通过影响NF-κB的活性而调控NO、iNOS、IL-6和TNF-α的表达。4.巨噬细胞经过LPS刺激后,MMP-9表达明显增加,与NF-κB表达相平行,应用丹酚酸A后,MMP-9的表达也随之显著降低,提示促进MMP-9的表达是NF-кB在炎症损伤的作用机制之一,丹酚酸A可通过NF-кB的炎症通路抑制MMP-9的释放,从而发挥其对机体的保护作用。