免疫PCR技术检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7

免疫PCR技术检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7

论文摘要

肠出血性大肠埃希菌O157:H7是引起人类出血性腹泻和溶血性尿毒症的重要食源性致病菌,它的感染问题已经受到世界各国的普遍关注。目前常用的细菌培养法耗时较长,灵敏度较低,而PCR方法费用较高,试验条件要求严格,而且容易出现假阳性。因此建立一种快速、灵敏、特异的检测手段,对大肠埃希菌O157:H7感染的诊断与预防尤为重要。本实验拟建立一种新颖的大肠埃希菌O157:H7的检测技术——免疫PCR技术,该技术将ELISA和PCR技术结合在一起,通过链霉亲和素将生物素化的DNA连接在生物素化抗体分子上,根据PCR扩增固相化的DNA报告分子来检测大肠埃希菌O157:H7。评价该方法检测大肠埃希菌O157:H7的灵敏度和特异性,并与ELISA法的检测灵敏度作对比。并利用免疫PCR法检测染菌的牛肉馅和牛奶标本,评价该方法检测食品标本的灵敏度。结果表明,免疫PCR法能够检测到10CFU/ml的大肠埃希菌O157:H7,比ELISA法的灵敏度提高了1000倍,而且具有很高的特异性。经过8小时增菌培养后,免疫PCR法检测牛肉馅和牛奶中大肠埃希菌O157:H7的最低限为10-3CFU/g(ml)。免疫PCR技术的建立为大肠埃希菌O157:H7的检测提供了一种新的手段,随着该技术的不断完善它将会被广泛应用于各种病原微生物的检测。

论文目录

  • 内容提要
  • 英文缩略词表
  • 第1章 绪论
  • 第1节 免疫PCR 技术及其应用
  • 1 免疫PCR 的基本原理
  • 2 DNA 报告分子与抗体的连接方式
  • 3 免疫PCR 扩增产物的检测及其特点
  • 4 免疫PCR 技术的应用
  • 第2节 肠出血性大肠埃希菌O157:H7 概述
  • 1 致病物质
  • 2 流行病学
  • 3 预防与治疗
  • 第3节 肠出血性大肠埃希菌O157:H7 检测技术的研究进展
  • 1 病原学检测
  • 2 免疫学检测
  • 3 分子生物学检测
  • 第2章 实验研究
  • 第1节 肠出血性大肠埃希菌O157:H7 多克隆抗体的制备
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 实验结果
  • 第2节 免疫PCR 法检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 实验结果
  • 第3章 讨论
  • 第4章 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 相关论文文献

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